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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 酶活性不稳定怎么办？
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vegue

银虫 (小有名气)

[求助] 酶活性不稳定怎么办？ 已有2人参与

我用的乙酰胆碱酯酶(重组人类AChE，有His tag)需要在37度下和一个药物反应三四天甚至更久，而这个酶的活性似乎稳定不了那么久，对照组的活性能掉一个数量级。我加了约0.5 μg/μL的BSA，效果还是不好。请问各位有什么招？
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1楼 2016-02-13 00:10:50
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

LuM_QD

金虫 (正式写手)
加10%的甘油试试，再试试triton X100

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呵呵
6楼2016-02-16 02:07:47
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普通回帖

fudan671

木虫 (著名写手)
要不然就重复取出后，再重新加入，过滤到原使酶。

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2楼2016-02-13 08:11:00
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小瀚龙

新虫 (正式写手)
加螯合剂

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3楼2016-02-13 08:22:23
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vegue

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by fudan671 at 2016-02-13 08:11:00
要不然就重复取出后，再重新加入，过滤到原使酶。

谢谢。你是说用活的的酶替换坏掉的酶？如果我只是要利用酶的活性，这当然是可以的，也很方便。不过在这里，这个酶的活性正是我观察的变量，换掉就失去意义了。我希望它稳定的目的是排除干扰因素。
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4楼2016-02-16 00:50:48
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vegue

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小瀚龙 at 2016-02-13 08:22:23
加螯合剂

谢谢。这个可以试试
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5楼2016-02-16 00:51:16
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vegue

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by LuM_QD at 2016-02-16 02:07:47
加10%的甘油试试，再试试triton X100

谢谢。正在试用甘油。
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7楼2016-02-16 05:38:46
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fudan671

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by vegue at 2016-02-16 00:50:48
谢谢。你是说用活的的酶替换坏掉的酶？如果我只是要利用酶的活性，这当然是可以的，也很方便。不过在这里，这个酶的活性正是我观察的变量，换掉就失去意义了。我希望它稳定的目的是排除干扰因素。...

嗯嗯那就将影响粒子全部去除

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8楼2016-02-16 07:46:29
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vegue

银虫 (小有名气)
我自己挖个坟：后来我加了叠氮钠，好了很多。估计之前是细菌混进来了。
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9楼2017-04-16 10:13:51
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梅紫独凯

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

加些还原性谷甘酸试试

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10楼2017-04-16 12:18:54
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