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philoqi新虫 (小有名气)
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[求助]
PCR扩增做的好好的，突然扩增不出来了，什么原因？
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PCR扩增做的好好的，一直很稳定，突然扩增不出来了，见图片1。后来换了机器，也是扩增不出来。前几天扩增出的也扩不出来了。重新溶解干粉引物也不行，引物有半年了，-20度保存。又把两个样本同时用两种引物做PCR，这种还是扩增不出，另一种引物可以扩增见图2。这两天扩增条带很暗，见图3，条件没有变，不知道什么原因？DNA应该没问题，是什么原因呢？ QQ图片1.jpg  图片2.png  图片3.png |
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6楼2016-02-09 19:47:51
2楼2016-01-31 18:57:14
bbqlhb
木虫 (小有名气)
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【答案】应助回帖
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philoqi: 金币+50, 博学EPI+1, ★★★很有帮助 2016-02-19 15:33:31
philoqi: 金币+50, 博学EPI+1, ★★★很有帮助 2016-02-19 15:33:31
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这种情况下就需要做个阳性控制看看。 原因几种可能，逐个排除： 1、酶，酶保存温度是不是低温-20？这个跟酶的质量有关。 2、引物，如果重新溶都没问题就可以排除了 3、试剂buffer。有些试剂会析出，你查看下是不是浓度已经变化了，如果排除上面的问题就重新配制试试。 |
3楼2016-02-07 12:16:23
philoqi
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
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- 专业: 临床微生物学检验
4楼2016-02-07 18:52:30
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