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philoqi

新虫 (小有名气)

[求助] PCR扩增做的好好的,突然扩增不出来了,什么原因?

PCR扩增做的好好的,一直很稳定,突然扩增不出来了,见图片1。后来换了机器,也是扩增不出来。前几天扩增出的也扩不出来了。重新溶解干粉引物也不行,引物有半年了,-20度保存。又把两个样本同时用两种引物做PCR,这种还是扩增不出,另一种引物可以扩增见图2。这两天扩增条带很暗,见图3,条件没有变,不知道什么原因?DNA应该没问题,是什么原因呢?

PCR扩增做的好好的,突然扩增不出来了,什么原因?
QQ图片1.jpg


PCR扩增做的好好的,突然扩增不出来了,什么原因?-1
图片2.png


PCR扩增做的好好的,突然扩增不出来了,什么原因?-2
图片3.png
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philoqi

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by bbqlhb at 2016-02-07 12:16:23
这种情况下就需要做个阳性控制看看。
原因几种可能,逐个排除:
1、酶,酶保存温度是不是低温-20?这个跟酶的质量有关。
2、引物,如果重新溶都没问题就可以排除了
3、试剂buffer。有些试剂会析出,你查看下是不 ...

引物换新的也这样,这两天能p出,但是拖尾,求解?

发自小木虫IOS客户端
4楼2016-02-07 18:52:30
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匿名

用户注销 (正式写手)

本帖仅楼主可见
2楼2016-01-31 18:57:14
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bbqlhb

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
philoqi: 金币+50, 博学EPI+1, ★★★很有帮助 2016-02-19 15:33:31
这种情况下就需要做个阳性控制看看。
原因几种可能,逐个排除:
1、酶,酶保存温度是不是低温-20?这个跟酶的质量有关。
2、引物,如果重新溶都没问题就可以排除了
3、试剂buffer。有些试剂会析出,你查看下是不是浓度已经变化了,如果排除上面的问题就重新配制试试。
3楼2016-02-07 12:16:23
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西玛芝瓜

新虫 (小有名气)

有可能是dna的问题,或者是pcr程序问题

发自小木虫Android客户端
5楼2016-02-09 08:01:36
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