应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 免疫实验 » 小鼠脾细胞Th流式CD4染色极少怎么破…
51/1返回列表
查看: 2898  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

ErtLee

金虫 (小有名气)

[求助] 小鼠脾细胞Th流式CD4染色极少怎么破… 已有2人参与

感觉做Th流式CD4+一直非常少，求大神讲解，下面是大概的流程…
淋巴细胞分离液处理的Balb/c正常小鼠脾细胞，大概1*10^6／ml，24孔板每孔1ml做刺激: PMA 50ng／ml, Ionomycin 1ug／ml, Golgistop 照BD说明书加的，刺激时间一般6~8h。第二天收了以后胞外染色、固定穿透、胞内染色。固定穿透用的是ebioscience的permeabilization buffer和fixation/ permeabilizaton concentrate，流式抗体都是ebioscience的(CD4,IL4, IFNr)。重复了几次下来都存在CD4+极少甚至染不上(0.5%以下，很多0.1%不到)。

请问这种染色效率是否正常？看到过一种说法是刺激物会引起CD4的表达量减少和内吞，这种情况在实验过程里应该怎么避免？CD3+CD8-作为CD4+的替代标记这种做法在小鼠细胞实验里是否能够得到认可？

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-01-29 16:46:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ErtLee

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ghqiu09 at 2016-03-03 21:25:24
我也用过PMA这些东西，一般都是刺激4个小时后就收了，不过夜。我记得看过一篇帖子，在4小时，JNK信号通路就已经激活了，到了后面并不清楚会不会发生什么变化，虽然和CD4这些应该没啥关系，但是4小时足以。。。

最近发现我这套溶液是做Treg核染的，做胞质染有另外的，或者直接多聚甲醛。每次做都是Th,Treg一起用的这套溶液，也不知道是不是这个原因。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2016-04-01 14:01:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

徐州往事

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

PMA刺激4小时以后CD4数量就开始下降，过夜培养数量会降的更低。如果必须过夜培养，可以利用CD3CD8反向射门来分析你所需要的细胞群。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2016-02-04 00:46:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ghqiu09

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
3楼2016-03-03 21:22:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ghqiu09

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
4楼2016-03-03 21:25:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] filecode +12 documentary 2026-08-10 13/650 2026-08-12 14:56 by wlwhappy
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 35/1750 2026-08-12 14:38 by sdfapple719
[基金申请] 长年满屏的广告，版主太不责任了。基金也等的急 +3 gltch 2026-08-12 3/150 2026-08-12 13:25 by dcqxinyang
[基金申请] 不应该看fileCode +4 且听虎啸 2026-08-12 4/200 2026-08-12 12:40 by 行无人
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +3 布布和一二 2026-08-11 4/200 2026-08-11 15:20 by aasahr
[基金申请] 听说今天filecode变了 +26 布布和一二 2026-08-06 49/2450 2026-08-11 13:18 by WH3796
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 13/650 2026-08-11 09:49 by 家与远方
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] fileCode有新解读？ +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode，很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭