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小鼠脾细胞Th流式CD4染色极少怎么破… 已有2人参与
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感觉做Th流式CD4+一直非常少，求大神讲解，下面是大概的流程… 淋巴细胞分离液处理的Balb/c正常小鼠脾细胞，大概1*10^6／ml，24孔板每孔1ml做刺激: PMA 50ng／ml, Ionomycin 1ug／ml, Golgistop 照BD说明书加的，刺激时间一般6~8h。第二天收了以后胞外染色、固定穿透、胞内染色。固定穿透用的是ebioscience的permeabilization buffer和fixation/ permeabilizaton concentrate，流式抗体都是ebioscience的(CD4,IL4, IFNr)。重复了几次下来都存在CD4+极少甚至染不上(0.5%以下，很多0.1%不到)。 请问这种染色效率是否正常？看到过一种说法是刺激物会引起CD4的表达量减少和内吞，这种情况在实验过程里应该怎么避免？CD3+CD8-作为CD4+的替代标记这种做法在小鼠细胞实验里是否能够得到认可？ 发自小木虫Android客户端 |
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5楼2016-04-01 13:58:13
徐州往事
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
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- 专业: 炎症、感染与免疫
2楼2016-02-04 00:46:23
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3楼2016-03-03 21:22:55
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4楼2016-03-03 21:25:24
