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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 想表达一人类酶，已知基因序列。如何表达？直接买质粒扩增还是从身上取一个细胞？
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Stridegogogo

捐助贵宾 (小有名气)

小可爱

[求助] 想表达一人类酶，已知基因序列。如何表达？直接买质粒扩增还是从身上取一个细胞？ 已有3人参与

如题
设计了引物怎么做啊
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分子克隆与蛋白结晶
1楼 2016-01-28 14:31:36
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1272356152

新虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 掌控恶魔 at 2016-02-01 10:33:18
人类的基因蛋白研究比较多，有相应的数据库。你既然知道这个序列就可以选择合成啊，如果有公司有该质粒也可以买，没有质粒就可以直接合成基因。取细胞来提取该目的基因你不觉得麻烦么？
如何表达就是另一回事情了。 ...

做基因合成2000以下1块四

发自小木虫Android客户端
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5楼2016-02-02 11:46:14
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yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有钱有货的话，直接买；
从已知有表达的细胞上逆转录后，接入质粒表达
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2楼2016-01-29 11:38:14
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你表达这个酶是打算做什么？是为了转染进细胞，然后把细胞弄碎了做WB，还是为了连上荧光，标记这个酶的位置，还是为了大规模制备这个酶，然后纯化出来，做体外酶活性实验？不同目的需要的载体不一样。我这里有很多载体，需要的话可以来问我。Q151354061

另外，你的酶的序列有多长？不长的话就RT一下好了，太长的话去买CDS，或者分段合成吧。
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3楼2016-01-29 14:38:49
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掌控恶魔

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

人类的基因蛋白研究比较多，有相应的数据库。你既然知道这个序列就可以选择合成啊，如果有公司有该质粒也可以买，没有质粒就可以直接合成基因。取细胞来提取该目的基因你不觉得麻烦么？
如何表达就是另一回事情了。这么说吧一个大致的过程：全基因合成---亚克隆及载体构建---蛋白表达纯化。其实你可以委托外面的公司进行这方面，术业有专攻嘛，你如果全部自己来等于是踏入另一个行业，需要重新积累经验，有不少的弯路要走，既耗费大量时间，也可能耗费大量的金钱。
如果有需要，你可以委托我们公司来表达纯化蛋白，你可以给我们质粒我们帮你纯化蛋白 也可以全部委托从从重组基因开始。
这是我的联系方式18939788108
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4楼2016-02-01 10:33:18
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