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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 做了七八十板定量，什么问题都碰到过了，就是不知道原因
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兜圈圈的幸福

新虫 (小有名气)

[求助] 做了七八十板定量，什么问题都碰到过了，就是不知道原因 已有1人参与

有没有知道这是出现了什么问题？

做了七八十板定量，什么问题都碰到过了，就是不知道原因


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1楼 2016-01-26 16:18:46
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兜圈圈的幸福

新虫 (小有名气)
求助啊，样品太多，做下去就是烧钱，可是就是不知道原因啊

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2楼2016-01-26 16:32:13
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丝竹睛明

新虫 (小有名气)
你这个溶解曲线有杂峰了，引物不行的吧

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3楼2016-01-26 16:45:48
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兜圈圈的幸福

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 丝竹睛明 at 2016-01-26 16:45:48
你这个溶解曲线有杂峰了，引物不行的吧

不同模板跑出来的峰不一样，这是另一板，同一对引物，是引物的问题吗
做了七八十板定量，什么问题都碰到过了，就是不知道原因-1



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4楼2016-01-26 16:47:21
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丝竹睛明

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 兜圈圈的幸福 at 2016-01-26 16:47:21
不同模板跑出来的峰不一样，这是另一板，同一对引物，是引物的问题吗

...

一般来说，起峰在80之前基本是二聚体，你这个前面的起峰比目的带还高，你把定量完的跑个胶，估计是有杂带或者二聚体的。换引物吧。你的引物没有半定量筛选吧（普通pcr跑胶看条带是否单一，然后再上机筛选，筛选好了再正式上样）？

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5楼2016-01-26 17:24:44
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兜圈圈的幸福

新虫 (小有名气)
又跑了一板，是引物问题，是小老板要用的数据，着急做，哎，又烧了好多钱

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6楼2016-01-26 17:28:43
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魚仔守衛

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
第一个图Tm值有90度，这么高啊。下面的图示明显非特异扩增了。还有楼主也没说清楚是遇到什么问题了。
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7楼2016-01-27 19:48:50
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