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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 用感受态大肠杆菌做质粒扩增，涂平板挑单个菌落37度摇菌，请问...
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观享世界

木虫 (小有名气)

[求助] 用感受态大肠杆菌做质粒扩增，涂平板挑单个菌落37度摇菌，请问... 已有1人参与

用感受态大肠杆菌做质粒扩增，涂平板挑单个菌落37度摇菌，请问摇菌时间20小时行不行，是不是太久了？还有，一般我们做质粒扩增，如果扩增前的质粒序列是我们想要的并且没问题，那么扩增后的质粒我们还需要测序验证吗？ @biostar2009

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书写人生
1楼 2016-01-26 13:04:09
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lifechuteng

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by 观享世界 at 2016-01-26 14:49:19
有时候我会把长好单菌落的平板放到4度冰箱，方便下一次挑菌摇菌，这样可以吗？
...

完全没问题的，我一般就将单克隆放在200μl培养基中，摇三个小时，稍微有点浓就可以了，然后菌落PCR验证。验证正确的再扩大体积培养，这样节省时间。

质粒扩增的话，我觉得都没有必要涂板挑单克隆……直接接一级种培养就好。反正有抗生素嘛……
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4楼2016-01-26 15:36:04
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duanjifu520

铜虫 (正式写手)
20个小时是没有问题的，我经常保持12-24小时之间，我用的是pet的质粒，另外，你这个是扩增质粒，如果确定母带质粒没有问题的话，正确扩增的概率在99%，如果实在不放心，扩增后跑胶时，可以酶切下再跑胶，测序方便的话当然测序更好，但是个人觉得没必要，除非后边的实验出现问题了，可以反过来验证

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2楼2016-01-26 13:22:00
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观享世界

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by duanjifu520 at 2016-01-26 13:22:00
20个小时是没有问题的，我经常保持12-24小时之间，我用的是pet的质粒，另外，你这个是扩增质粒，如果确定母带质粒没有问题的话，正确扩增的概率在99%，如果实在不放心，扩增后跑胶时，可以酶切下再跑胶，测序方便的 ...

有时候我会把长好单菌落的平板放到4度冰箱，方便下一次挑菌摇菌，这样可以吗？

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书写人生
3楼2016-01-26 14:49:19
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