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ccat1994

新虫 (初入文坛)

[求助] 如何验证感受态细胞是否染菌 已有2人参与

最近做实验,用蓝白斑筛先筛出转化子,然后接着做平行转板和菌落pcr验证,结果发现菌落pcr验出来的菌对应的转板上的菌落变蓝了!并且感觉是单克隆的形态。觉得很奇怪,所以我在下次做的时候,验证了一下感受态是否被污染,就做了两个操作:1,直接将负80℃取出的感受态涂布到抗性板上,看是否生长。2,将空载体导入感受态中转化涂板。结果是:1,抗性板上无菌生长。2,转化出的空载几乎全是白的,而不是蓝的! 我觉得这两个结果很矛盾,所以我想问问是不是我验证有问题

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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
转化后,然后抗性平皿涂板。
2楼2016-01-25 09:14:30
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ccat1994

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by hc-material at 2016-01-25 09:14:30
转化后,然后抗性平皿涂板。

我这样做过,但是在抗性板我同时添加了iptg和xgal,长出来的几乎都是白菌落

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3楼2016-01-25 09:16:58
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
仔细看看载体结构,是不是你没有用载体设计的插入位点。
4楼2016-01-26 17:18:27
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丝竹睛明

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by hanxiaominhu at 2016-01-26 17:18:27
仔细看看载体结构,是不是你没有用载体设计的插入位点。

想多了,一般不会污染的

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5楼2016-01-26 17:45:06
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小妖宝宝

金虫 (小有名气)

添加xgal后,长出来的菌可能出现假阳性,也就是说白斑不一定都是转化成功的,蓝斑也不定都是没有转化的……建议不加xgal,转化后随机挑选菌落直接做pcr和双酶切检验

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淡淡的呼吸···
6楼2016-01-26 17:54:47
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