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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 杂带较多，如何处理
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shapuofeng1

新虫 (初入文坛)

[求助] 杂带较多，如何处理 已有7人参与

我现在对温度进行考察，40个循环，温度高条带不好，温度低杂带太多，问大神如何处理？总50ul，引物各2ul（20uM），模板4ul，水17ul，混合物25ul。我需要对引物和模板进行调整吗？变性94℃，延伸72℃，退火在39-45之间。

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1楼 2016-01-24 16:45:39
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jinfangli

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
退火温度过低，55-75摄氏度，温度越高特异性越好，选择最高温度P出来的条带
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fight
8楼2016-01-25 14:54:25
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shapuofeng1

新虫 (初入文坛)
图片如下！

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2楼2016-01-24 16:48:30
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shapuofeng1

新虫 (初入文坛)
12
杂带较多，如何处理
2016-1-24（1-23-1 PCR重复12次）1副本.jpg
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4楼2016-01-24 17:08:10
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原海亮

木虫 (著名写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-24 22:21:00
模板是什么呢？话说温度梯度也太小了吧，我们常做50-70度。

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
5楼2016-01-24 18:46:19
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