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shapuofeng1

新虫 (初入文坛)

[求助] 杂带较多,如何处理 已有7人参与

我现在对温度进行考察,40个循环,温度高条带不好,温度低杂带太多,问大神如何处理?总50ul,引物各2ul(20uM),模板4ul,水17ul,混合物25ul。我需要对引物和模板进行调整吗?变性94℃,延伸72℃,退火在39-45之间。

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分子2010

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
退火温度太低,可以升高看看。高温会增强引物特异性并减少杂带。如果还是不行,可以适当调整模板和引物的量
科研是条不归路!
7楼2016-01-25 13:44:22
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shapuofeng1

新虫 (初入文坛)

2楼2016-01-24 16:48:30
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shapuofeng1

新虫 (初入文坛)

12
杂带较多,如何处理
2016-1-24(1-23-1 PCR重复12次)1副本.jpg

4楼2016-01-24 17:08:10
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原海亮

木虫 (著名写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-24 22:21:00
模板是什么呢?话说温度梯度也太小了吧,我们常做50-70度。

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天空才是极限,我有信心飞的更高!
5楼2016-01-24 18:46:19
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