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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 大肠杆菌发酵求指导！
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奔狼

新虫 (初入文坛)

[求助] 大肠杆菌发酵求指导！ 已有5人参与

请教各位大神，大肠杆菌发酵。
一、诱导后一两个小时出现溶菌，这是怎么回事，该如何解决啊？
二、看到很多人说发酵OD做到七八十，更有一百多的，我的才30-40！！！  这个注意是培养基的问题，还是什么问题？
三、诱导一个小时以后，OD就不再长了，这又是什么原因呢？

新人求指导，望各位大神不吝赐教！！！
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1楼 2016-01-23 11:15:49
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1.诱导1、2个小时溶解，各种可能都有，比如，其代谢产物对自身细胞有破坏作用，产生溶菌酶，发酵条件不合适等，
2.大肠发酵0D做到100多很正常也很普遍，培养基及补料是实现高密度发酵的主要因素，这个慢慢摸索吧，主要补料。补料速度，补料配方等。
3.诱导一小时后不长，大多是培养条件没控制好，比如非产物（垃圾）产生的太多一直菌的生长，比如葡萄糖浓度太高，产生葡萄糖效应等。

多看文献的同时在学学基本的理论，代谢过程，慢慢摸索吧，另外摇瓶不溶，不代表发酵罐不溶，摇瓶和发酵罐完全是两码事。祝顺利。
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4楼2016-01-25 10:09:07
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普通回帖

陈梓之诺

新虫 (小有名气)
会不会你的菌里参杂了溶源菌？有感染么？

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2楼2016-01-23 11:24:47
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奔狼

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 陈梓之诺 at 2016-01-23 11:24:47
会不会你的菌里参杂了溶源菌？有感染么？

不太像，摇瓶小试做的没问题。
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3楼2016-01-23 13:35:46
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a2703521

金虫 (小有名气)

123
我们OD能做到240，补料培养
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5楼2016-01-26 16:41:46
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a2703521

金虫 (小有名气)

123

【答案】应助回帖

1.诱导后溶菌，首先考虑是不是操作上出了问题。或者发酵过程参数波动很大，例如压力，PH等的影响；
2.诱导以后OD不长，有可能是诱导剂的用量太高，还有你诱导的温度和诱导剂的加入方法有时候也会有影响；
3.生长多久以后开始诱导？罐体是否有死角没有处理干净？
4.诱导时间把握不对
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6楼2016-01-26 16:47:35
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X小天T

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

一般溶菌现象可能是噬菌体污染了，参照噬菌体污染的解决办法。这个问题解决后，后面就不是问题了
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7楼2016-01-26 21:55:44
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奔狼

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by a2703521 at 2016-01-26 16:47:35
1.诱导后溶菌，首先考虑是不是操作上出了问题。或者发酵过程参数波动很大，例如压力，PH等的影响；
2.诱导以后OD不长，有可能是诱导剂的用量太高，还有你诱导的温度和诱导剂的加入方法有时候也会有影响；
3.生长多 ...

您好，请问您所说的操作上的问题指的是？  
压力基本没变化，PH在7左右。有时候升到7.2、7.3。
IPTG终浓度0.1-0.15，直接倒进去的。
生长四五个小时开始诱导的。
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8楼2016-02-02 10:23:32
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奔狼

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by a2703521 at 2016-01-26 16:41:46
我们OD能做到240，补料培养

太猛了吧  怎么搞得啊
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9楼2016-02-02 10:25:46
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奔狼

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by hc-material at 2016-01-25 10:09:07
1.诱导1、2个小时溶解，各种可能都有，比如，其代谢产物对自身细胞有破坏作用，产生溶菌酶，发酵条件不合适等，
2.大肠发酵0D做到100多很正常也很普遍，培养基及补料是实现高密度发酵的主要因素，这个慢慢摸索吧， ...

我该如何解决这问题呢？  能不能指点一下方向？
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10楼2016-02-02 10:28:34
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