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大肠菌

新虫 (初入文坛)

[求助] 限制性核酸内切酶识别位点确定的实验方法 已有1人参与

怎么去测序或者确定一种限制性核酸内切酶的酶识别位点，求相关论文和实验方法！
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相识是一种缘分！！珍惜每个相识的人！！
1楼 2016-01-22 12:54:46
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sail000000

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
酶的酶切位点是可以在网上找到的，测序的话可以在他的上游设计引物往下游测
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2楼2016-01-22 14:51:28
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大肠菌

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sail000000 at 2016-01-22 14:51:28
酶的酶切位点是可以在网上找到的，测序的话可以在他的上游设计引物往下游测

我的意思是如何去确定一个未知的内切酶的酶切位点的碱基。手上有个限制酶想去确定下酶切位点，有什么方法可以确定或测定呢
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相识是一种缘分！！珍惜每个相识的人！！
3楼2016-01-22 16:10:51
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大肠菌

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sail000000 at 2016-01-22 14:51:28
酶的酶切位点是可以在网上找到的，测序的话可以在他的上游设计引物往下游测

我试过用商品化的酶去切质粒然后在测序，这样的方法确定酶切位点碱基。可是这样的测序，在酶切位点处总有些碱基测不出来，只能确定能不能被切，无法判断具体是在哪个碱基间切的
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相识是一种缘分！！珍惜每个相识的人！！
4楼2016-01-22 16:14:23
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