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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 求养raw264.7.经验。
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济沐

新虫 (初入文坛)

[求助] 求养raw264.7.经验。 已有2人参与

跪求养细胞经验。本人研一，现在需要raw246.7做实验，可是养的细胞老是变长，发生分化，以至于无法做实验。从新复苏细胞，细胞存活率又很低。又实在找不出养不好这个细胞原因。求大神指点

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1楼 2016-01-21 19:44:13
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zhangshuman

新虫 (小有名气)
细胞变成变细可能是血清浓度不够

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2楼2016-01-21 19:49:06
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济沐

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhangshuman at 2016-01-21 19:49:06
细胞变成变细可能是血清浓度不够

可是，师姐他们一直都是用10％的血清。养的还都挺好呀

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3楼2016-01-21 20:18:21
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zhangshuman

新虫 (小有名气)
细胞长得快而且密的时候可以适当多加些培养液，比如之前加15ml可以加20ml

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4楼2016-01-21 21:04:23
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shengliding

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
RAW细胞应该是最好养的了，随便在网上搜一下，会有很多关于这方面的方法。液氮保存的细胞取出来活化，也要按照要求来冻融，包括培养基和血清的预热。平时根据你接种的数量来换培养液，3天换一次，5天转一代，保持在80%的覆盖率，也可以简单根据培养液的颜色变化，等都变黄了，状况就太差了，换的时候还要用PBS冲洗两三遍。转代也要注意，要PBS冲洗干净，trypsin处理时间的把握等。 有的人说7-10代就丢掉，有的说没关系，我用到高代也没见有什么变化，以防万一，重要测试最好用代数少的。要养好细胞，要用心，细心，勤观察和良好的操作习惯。
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5楼2016-01-23 08:49:31
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songqianness

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by shengliding at 2016-01-23 08:49:31
RAW细胞应该是最好养的了，随便在网上搜一下，会有很多关于这方面的方法。液氮保存的细胞取出来活化，也要按照要求来冻融，包括培养基和血清的预热。平时根据你接种的数量来换培养液，3天换一次，5天转一代，保持在 ...

我复苏了师兄去年冻存的细胞 一直养的不好 细胞贴壁很少 很多都飘着 也不敢离心 不知道怎么解决
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6楼2016-01-23 13:39:55
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shengliding

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

估计是收集细胞时Trypsin处理不当。不用离心，RAW贴壁很快，6个小时后就可以倒掉没有贴壁的细胞，转代两三次就应该好了，你可以自己保存一批。
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7楼2016-01-25 00:38:56
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songqianness

新虫 (初入文坛)
楼主能否赠一瓶细胞给我 我是一直复苏一个师兄的 一直养不活 好闹心
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8楼2016-01-25 10:56:04
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darkarrow

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

建议macrophage不要用trypsin消化，直接用细胞刮子，然后吹散，再进行传代，trypsin很容易让Raw细胞长得不好
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9楼2016-01-25 14:19:48
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