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34100313

铜虫 (正式写手)

[求助] 膜蛋白纯化菜鸟一枚,向各位大侠请教一下纯化中的问题,蛋白为两次跨膜 已有1人参与

在大肠杆菌里表达一个动物膜蛋白的全长,buffer里没有加detergent,破碎后离心取上清,拿去测活性,加了对照,发现确实有活性,尚未过分子筛,所以不知道蛋白形成aggregation的比例,不知道后续纯化过程需不需要加detergent?
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xfy821523052

金虫 (小有名气)

脉冲电场;食品加工

【答案】应助回帖

首先,要知道detergent加入有什么作用?如果对aggregation没啥影响和对活性没影响就可以加,我感觉如果没啥特殊功能就不要加了,和前期做的工作保持一致。

发自小木虫Android客户端
2楼2016-02-15 19:36:22
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34100313

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xfy821523052 at 2016-02-15 19:36:22
首先,要知道detergent加入有什么作用?如果对aggregation没啥影响和对活性没影响就可以加,我感觉如果没啥特殊功能就不要加了,和前期做的工作保持一致。

加detergent可以从膜中更多的提取到目的蛋白,且蛋白在detergent环境中更稳定
3楼2016-03-03 15:44:39
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