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cynjau金虫 (小有名气)
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[交流]
转化10多次得不到转化子，请大家帮忙分析
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最经一个多月一直在做这个实验，10次多没有获得重组子，很是郁闷.请大家帮忙分析一下： （1）目的片段先克隆到pMD19 sample上提取质粒，用TAKARA购买的BamHI和speI双酶切12小时，回收我的目的片段300bp; (2)重组用的质粒约5900bp,同样用TAKARA购买的BamHI和speI双酶切12小时，回收酶切产物； （3）回收的目的片段和载体电泳后估计其浓度后，按照载体：目的片段=1：10来T4连接酶16度，连接16小时后转化； 我觉得转化和感受态没有问题啊，10多次了，感受态也用T载体检测了没有问题的！可是就是不知道为什么就是得不到重组子啊？ 现在怀疑是不是没有连接上。可是载体5900bp,目的片段300bp.连接产物电泳和质粒在胶上也看不出来啊！有什么办法确定是否连接上呢？ 还有就是在转化后吸取100ul涂在抗性平板上，有时出现满板的糊状，一片一片的，仔细看是些很微小微小的菌落，可是他们长48小时还是那么小，这有是怎么回事？ 请大家帮忙分析啊，谢谢啊，极度郁闷中！ |
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