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小芭啦

金虫 (小有名气)

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[求助] 用于线虫的质粒能转染细胞吗？已有3人参与

本人手上有带有目的基因的质粒，但这个质粒是做线虫的同学好心给的，质粒信息如下：
启动子是Punc-25，是C-elegans unc-25基因的启动子（这个基因表达于线虫GABA运动神经元）
还有一个unc-54 3’ UTR，位于目的基因下游，应该是终止密码子吧？
导师说用这个质粒转染哺乳动物细胞，想问问各位能用吗？我查到质粒构建的时候要筛选适合宿主细胞表达的强启动子和较好的终止子，这样才有助于目的基因的大量表达，好像哺乳动物启动子CMV，SV-40这些是比较好的吗？

新手一枚，分子生物方面完全是个门外汉，请求各位虫友帮助，问题可能有点傻，求高手勿喷

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1楼 2016-01-20 15:41:42

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小芭啦

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送红花一朵

引用回帖:

5楼: Originally posted by sunlk at 2016-02-22 16:09:01
不知道能不能表达，很大程度是不能表达的，此外3'UTR是非翻译区，含有终止密码子以及协助终止的信号序列。你可以将目的基因插入到含有CMV启动子的载体中，这样表达量就会很高；SV40启动子没有CMV启动子活性强，一般 ...

非常感谢，您说的很对，目前是准备在这个基础上构建含CMV启动子及目的片段的质粒

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]