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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 转基因 » 关于eGFP表达问题
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ljy525380

铜虫 (小有名气)

[求助] 关于eGFP表达问题

这两天做实验遇到一个问题，转基因的绿色荧光蛋白不表达，想请教下大家。我在绿色荧光蛋白eGFP的N端连接有我的基因，C端融合有gus基因，我想问一下，这种情况是不是影响了eGFP蛋白的构象折叠，而导致荧光检测不到？
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1楼 2016-01-18 16:35:19
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Mei921203

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 大鹏鸟100 at 2016-01-19 09:22:05
先看一下N端连上你的蛋白之后有没有破坏读码框吧，还有就是你的蛋白之前有没有kozak序列等，根据我的经验，只要不破坏读码框，一般没事

在目的基因的C端连接GFP时，中间需要加Linker吗？我直接去掉终止密码子，然后紧跟着GFP的起始密码子ATG，会影响荧光信号吗？

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6楼2018-01-14 00:55:09
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大鹏鸟100

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
ljy525380: 金币+10, ★★★很有帮助 2016-01-20 11:18:27
先看一下N端连上你的蛋白之后有没有破坏读码框吧，还有就是你的蛋白之前有没有kozak序列等，根据我的经验，只要不破坏读码框，一般没事
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2楼2016-01-19 09:22:05
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ljy525380

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 大鹏鸟100 at 2016-01-19 09:22:05
先看一下N端连上你的蛋白之后有没有破坏读码框吧，还有就是你的蛋白之前有没有kozak序列等，根据我的经验，只要不破坏读码框，一般没事

谢谢，我的读码框没有问题，只是蛋白之前没有kozak序列，这样影响大么
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3楼2016-01-20 11:18:16
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大鹏鸟100

木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ljy525380 at 2016-01-20 11:18:16
谢谢，我的读码框没有问题，只是蛋白之前没有kozak序列，这样影响大么...

质粒本身酶切位点之前也没有么？
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4楼2016-01-21 17:25:41
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