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ljy525380

铜虫 (小有名气)

[求助] 关于eGFP表达问题

这两天做实验遇到一个问题,转基因的绿色荧光蛋白不表达,想请教下大家。我在绿色荧光蛋白eGFP的N端连接有我的基因,C端融合有gus基因,我想问一下,这种情况是不是影响了eGFP蛋白的构象折叠,而导致荧光检测不到?
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大鹏鸟100

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
ljy525380: 金币+10, ★★★很有帮助 2016-01-20 11:18:27
先看一下N端连上你的蛋白之后有没有破坏读码框吧,还有就是你的蛋白之前有没有kozak序列等,根据我的经验,只要不破坏读码框,一般没事
2楼2016-01-19 09:22:05
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ljy525380

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 大鹏鸟100 at 2016-01-19 09:22:05
先看一下N端连上你的蛋白之后有没有破坏读码框吧,还有就是你的蛋白之前有没有kozak序列等,根据我的经验,只要不破坏读码框,一般没事

谢谢,我的读码框没有问题,只是蛋白之前没有kozak序列,这样影响大么
3楼2016-01-20 11:18:16
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大鹏鸟100

木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by ljy525380 at 2016-01-20 11:18:16
谢谢,我的读码框没有问题,只是蛋白之前没有kozak序列,这样影响大么...

质粒本身酶切位点之前也没有么?
4楼2016-01-21 17:25:41
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huizhenli

新虫 (初入文坛)

请问楼主是转植物细胞吗?

发自小木虫Android客户端
5楼2016-02-24 20:19:48
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Mei921203

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 大鹏鸟100 at 2016-01-19 09:22:05
先看一下N端连上你的蛋白之后有没有破坏读码框吧,还有就是你的蛋白之前有没有kozak序列等,根据我的经验,只要不破坏读码框,一般没事

在目的基因的C端连接GFP时,中间需要加Linker吗?我直接去掉终止密码子,然后紧跟着GFP的起始密码子ATG,会影响荧光信号吗?

发自小木虫Android客户端
6楼2018-01-14 00:55:09
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