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youyi

铜虫 (小有名气)

[求助] 如何用酶标仪测试反应动力学? 已有3人参与

现在想用酶标仪测乙酰胆碱酯酶的活性,并加入不同浓度的抑制剂来看不同浓度抑制剂的抑制效果。但是不知道该如何检测?
酶标仪有两种检测方法:一种是直接测吸收波长的OD值,96孔板直接扫描出对应孔的OD值;还有一种测酶反应动力学的选项,假设1min间隔,测10min,出现11组数据,该如何做动力学?怎样比较抑制剂的抑制作用?体现动力学?
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cccontainer

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我用的选项是测动力学的曲线,softmax软件。处理数据时,先根据一个浓度,做出时间和吸光值的散点图,添加趋势线,几种浓度抑制剂的趋势线都做好后,根据他们相应的趋势线斜率计算抑制率,从而绘制抑制率曲线图。
2楼2016-03-23 10:38:12
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wxy_0808

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

在酶标仪动力学测定模式下,获取个反应时间点下OD值,用Linewaver-Burk双倒数作图求得乙酰胆碱酯酶反应动力学米氏常数Km及Vmax,绘制曲线即可。依据Km及Vmax反应抑制剂的抑制作用。
3楼2016-03-23 17:20:11
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海之蓝的美

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wxy_0808 at 2016-03-23 17:20:11
在酶标仪动力学测定模式下,获取个反应时间点下OD值,用Linewaver-Burk双倒数作图求得乙酰胆碱酯酶反应动力学米氏常数Km及Vmax,绘制曲线即可。依据Km及Vmax反应抑制剂的抑制作用。

你好,我准备做酶动力学,不太明白那个反应初速率要怎么测,以及反应速率的就算,麻烦你看见后,能指导一下,急求
4楼2016-05-16 20:17:14
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tulipsy

铜虫 (正式写手)

楼主你好,请问用酶标仪测试反应初速率以及反应速率的求算问题解决了么?我也遇到了相同的困扰,一直卡在这个地方,急需···谢谢···
5楼2017-05-10 10:39:43
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

MD软件程序设置和初始速度如图
如何用酶标仪测试反应动力学?
动力学参数设置.png


如何用酶标仪测试反应动力学?-1
初始速度为线性部分.png

6楼2017-05-10 11:25:06
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是姜姜姜!

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cccontainer at 2016-03-23 10:38:12
我用的选项是测动力学的曲线,softmax软件。处理数据时,先根据一个浓度,做出时间和吸光值的散点图,添加趋势线,几种浓度抑制剂的趋势线都做好后,根据他们相应的趋势线斜率计算抑制率,从而绘制抑制率曲线图。

您好,请问做的趋势线斜率是酶活力吗
7楼2022-10-09 16:32:00
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