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虫卜1988

新虫 (著名写手)

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[求助] 求大神～启动子研究，gus表达，用的pbi121 已有1人参与

大家好，本人准备做不同材料的同一个基因启动子研究。序列我已知道，存在差异。所以要比较两个材料的启动子是不是活性不一样。目前手头可以用的载体是pbi 121，15000bp左右，打算把自己的启动子置换掉载体gus报告基因前面的35s启动子。我目前有两个问题不清楚。求大神们指导。1. 使用plantcare预测时，有+-链的结果，我是考虑正义链就可以了还是正义链反义链都需要看？？？我问了我身边几个做过的，他们也没有说清。2.构建载体时看论坛有人说考虑移码突变。我是这么想的，克隆时F引物只要不打断前面的元件，后面的R引物刚好设计到我的目的基因ATg前面的一个碱基，这样子启动子再整到121载体上，后面的gus应该不会导致移码突变了对吗？我的启动子有atg，但是在网上查只要启动子有转录起始位点，里面的atg不会作为翻译起始位点的，所以就没有考虑它们和gus前的碱基是不是3的倍数。这样子想对吗？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

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1楼 2016-01-18 10:35:19

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浩二

新虫 (小有名气)

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专业: 病原真菌学

引用回帖:

2楼: Originally posted by xiangbchen at 2016-01-18 13:12:48
1. 看正义链。
2. 不存在移码突变的问题。
3. 确定你所用启动子对应基因的转录起始位点（一般是5＇UTR顶端），对该转录起始位点开始转录包含GUS的融合mRNA进行ORF分析，检测是否影响GUS的翻译。
...

大神，我有好多启动子方面的问题想找找专家问问，可以跟你联系么、？