| 查看: 2451 | 回复: 7 | |||
[求助]
求大神～启动子研究，gus表达，用的pbi121 已有1人参与
|
|
大家好，本人准备做不同材料的同一个基因启动子研究。序列我已知道，存在差异。所以要比较两个材料的启动子是不是活性不一样。目前手头可以用的载体是pbi 121，15000bp左右，打算把自己的启动子置换掉载体gus报告基因前面的35s启动子。我目前有两个问题不清楚。求大神们指导。1. 使用plantcare预测时，有+-链的结果，我是考虑正义链就可以了还是正义链反义链都需要看？？？我问了我身边几个做过的，他们也没有说清。2.构建载体时看论坛有人说考虑移码突变。我是这么想的，克隆时F引物只要不打断前面的元件，后面的R引物刚好设计到我的目的基因ATg前面的一个碱基，这样子启动子再整到121载体上，后面的gus应该不会导致移码突变了对吗？我的启动子有atg，但是在网上查只要启动子有转录起始位点，里面的atg不会作为翻译起始位点的，所以就没有考虑它们和gus前的碱基是不是3的倍数。这样子想对吗？ [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 虫友问答-分子生物 |
» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有91人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
xiangbchen
金虫 (正式写手)
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 1669
- 散金: 74
- 红花: 7
- 帖子: 594
- 在线: 149.9小时
- 虫号: 1473479
- 注册: 2011-11-02
- 性别: GG
- 专业: 植物学
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
1. 看正义链。 2. 不存在移码突变的问题。 3. 确定你所用启动子对应基因的转录起始位点（一般是5＇UTR顶端），对该转录起始位点开始转录包含GUS的融合mRNA进行ORF分析，检测是否影响GUS的翻译。 发自小木虫Android客户端 |
2楼2016-01-18 13:12:48
gongming2199
铁虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 248.5
- 红花: 1
- 帖子: 44
- 在线: 19.6小时
- 虫号: 1312605
- 注册: 2011-06-01
- 性别: GG
- 专业: 林木遗传育种学
|
你好，我是南京林业大学的，我们实验室的pbi121找不到了，方便的话你能给我点吗？买公司的太贵，我们质粒都是找别人要的，不会让你白辛苦的，你看可以吗？ 发自小木虫Android客户端 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
虫卜1988
3楼2016-09-08 06:50:09
4楼2016-12-22 18:40:03
5楼2016-12-22 18:41:32
6楼2016-12-23 02:29:02
7楼2016-12-23 02:30:20
8楼2016-12-23 02:32:19
