【答案】应助回帖

11楼2016-01-16 22:39:09

张小蛋

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10楼: Originally posted by qiidong at 2016-01-16 22:36:07
缓冲液里没有加高浓度nacl？需要加300或500mmol盐

因为是对照说明书做的，就没加，我师姐是按说明书这么做的，我俩酶不一样，她的提出来了，不知道有没有影响，我试试~

12楼2016-01-16 23:26:21

张小蛋

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11楼: Originally posted by bright8 at 2016-01-16 22:39:09
变形一下，就怕会影响蛋白质的活性或功能啦！
...

我导师说这个浓度不足以变性，实在不行还可以复性，我提纯是为了测酶学性质的，我也考虑过这个问题，我导师说不用担心，我也有点混乱了

13楼2016-01-16 23:28:11

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10楼: Originally posted by qiidong at 2016-01-16 22:36:07
缓冲液里没有加高浓度nacl？需要加300或500mmol盐

是每种缓冲液都需要加吗？还是只有哪步需要加呢？

14楼2016-01-16 23:32:22

qiidong

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平衡液、洗涤、洗脱都要加，只有破菌液不加，破菌液离心后补加盐至0.5mol。

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15楼2016-01-17 03:33:03

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15楼: Originally posted by qiidong at 2016-01-17 03:33:03
平衡液、洗涤、洗脱都要加，只有破菌液不加，破菌液离心后补加盐至0.5mol。

我破菌用的是超声波，也就是超声之后离心上清液需要加是么？终浓度需要达到0.5mol~是这个意思吗？

16楼2016-01-17 07:26:56

qiidong

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是的，没错。柱子先用含盐缓冲液平衡，平衡液你先不要加咪唑，先保证能吸上去，有的蛋白几十mmol咪唑就下来了

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17楼2016-01-17 08:44:29

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13楼: Originally posted by 张小蛋 at 2016-01-16 23:28:11
我导师说这个浓度不足以变性，实在不行还可以复性，我提纯是为了测酶学性质的，我也考虑过这个问题，我导师说不用担心，我也有点混乱了...

那你可以试一下呗。

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18楼2016-01-17 09:15:46

张小蛋

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17楼: Originally posted by qiidong at 2016-01-17 08:44:29
是的，没错。柱子先用含盐缓冲液平衡，平衡液你先不要加咪唑，先保证能吸上去，有的蛋白几十mmol咪唑就下来了

嗯嗯，长知识了~我平衡液里就加咪唑，直接就都下来了~我试试

19楼2016-01-17 10:02:23

Mr.四娃

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【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
张小蛋: 金币+2, ★★★很有帮助 2016-01-19 19:01:39

把80那个梯度的咪唑降到40，250梯度的加到300，还不行的话就换一下凝胶吧，或者重新测序以确保基因正确

20楼2016-01-19 11:24:36