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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » His标签木聚糖酶不挂住
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张小蛋

新虫 (小有名气)
引用回帖:
20楼: Originally posted by Mr.四娃 at 2016-01-19 11:24:36
把80那个梯度的咪唑降到40，250梯度的加到300，还不行的话就换一下凝胶吧，或者重新测序以确保基因正确

我测序序列了发现我的根本没有His6尾巴~太感谢了~
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21楼2016-01-19 19:01:24
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Mr.四娃

金虫 (小有名气)
引用回帖:
21楼: Originally posted by 张小蛋 at 2016-01-19 19:01:24
我测序序列了发现我的根本没有His6尾巴~太感谢了~...

赶快加上histag试试吧，祝早日成功

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22楼2016-01-19 21:12:24
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澳北

铁虫 (初入文坛)
可以换下介质nta，有空可以看下空间结构，还不挂住就重新表达一次，确定是自己目的蛋白。

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23楼2016-01-19 22:08:50
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peterwj2007

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

建议试下"Ni-IDA"配基的填料，Ni-NTA和his标签的亲和力相对较弱，低浓度咪唑就可以洗脱；当然也可能是，标签被包裹到蛋白内部了
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24楼2016-01-21 21:11:30
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谦虚求解

铜虫 (小有名气)
您好，我想咨询一下您测定酶活的底物用的是什么型号呢？
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25楼2018-05-06 16:20:15
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