24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 327  |  回复: 5
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

lybio

金虫 (正式写手)

[交流] 平端连接后鉴定方向的问题

实验中先用中间载体(载体中已连接一个基因片断,此基因片断中间有个酶切位点,酶切后与另一个DNA片断平端连接)上的引物P1、P4(即为已连接基因的 两端引物)和DNA片断引物P2、P3扩增质粒(六个菌液PCR为阳性的菌液中抽提的质粒),可得到预期片断(分别为3.0kb和1.0kb),验证了片断已经与载体连接上了。再通过载体的引物P1和片断的引物P3,以及片断引物P2和载体的引物P4分别扩增质粒,电泳结果用载体的引物P1和片断的引物P3都无P出条带,用片断引物P2和载体的引物P4扩增,四个质粒有条带,按常理说,只要有条带,不就证实连接方向正确嘛,如果连接方向不对,根本P不出条带。但问题是它们扩增的条带片断为0.9kb,不是预期片断大小2.0kb。想请教大伙出现这现象的原因,和其他鉴定方向的方法
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lybio

金虫 (正式写手)

如果平端连接方向正确的话,它应该是--p1-p2-p3-p4-- 得用P1、P3和P2、P4扩增;如果连接方向正好反了,则是楼上说的那样
6楼2008-10-05 17:08:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

秦廷

银虫 (初入文坛)

已经用载体的引物P1和片断的引物P3,就没有必要用片断引物P2和载体的引物P4扩增吧
要选也是P1和P3一对,加P1和P2一对
P1和P3扩不出来,那P2和P4也应该扩增不出来

扩增出的0.9kb条带是否是正常的明亮带,还是比较弱的暗带
2楼2008-10-03 19:46:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lybio

金虫 (正式写手)

相对P1,P4和P2,P3扩增出来的条带来说是弱的
请问如何能把图片直接贴在主题里,而不是附件的方式?
3楼2008-10-03 22:53:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenliang_0513

铁杆木虫 (职业作家)

提高退火温度看看吧
你用什么酶做的鉴定?r-taq?
最好用LA-taq
我本将心向明月,奈何明月照沟渠?
4楼2008-10-04 11:01:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料求调剂 一志愿哈工大总分298分,前三科223分 +3 dongfang59 2026-03-27 3/150 2026-03-28 00:54 by 无懈可击111
[考研] 320分,材料与化工专业,求调剂 +5 一定上岸aaa 2026-03-27 7/350 2026-03-27 22:21 by 一定上岸aaa
[考研] 295材料工程专硕求调剂 +5 1428151015 2026-03-27 5/250 2026-03-27 22:17 by 无际的草原
[考研] 化学调剂 +4 爱吃番茄的旭 2026-03-24 5/250 2026-03-27 17:50 by kiokin
[考研] 328求调剂 +6 嗯滴的基本都 2026-03-27 6/300 2026-03-27 16:49 by sanrepian
[考研] 安徽大学专硕生物与医药专业(086000)324分,英语已过四六级,六级521,求调剂 +4 美味可乐鸡翅 2026-03-26 4/200 2026-03-27 15:27 by 星空星月
[考研] 317求调剂 +5 十闲wx 2026-03-24 5/250 2026-03-27 13:48 by 杨杨杨紫
[考研] 一志愿华东理工大学081700,初试分数271 +6 kotoko_ik 2026-03-23 7/350 2026-03-27 12:29 by 惠州彭于晏
[考研] 329求调剂 +4 星野? 2026-03-26 4/200 2026-03-27 12:00 by 不吃魚的貓
[考研] 调剂 +3 李嘉图·S·路 2026-03-27 3/150 2026-03-27 11:19 by wangjy2002
[考研] 求调剂,一志愿 南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕 +4 @taotao 2026-03-26 5/250 2026-03-27 08:10 by hypershenger
[考研] 351求调剂 +4 麦克阿磊 2026-03-24 4/200 2026-03-27 00:32 by wxiongid
[考研] 总分322求生物学/生化与分子/生物信息学相关调剂 +5 星沉uu 2026-03-26 6/300 2026-03-26 19:02 by macy2011
[考研] 调剂310 +3 温柔的晚安 2026-03-25 4/200 2026-03-25 23:16 by peike
[考研] 284求调剂 +15 Zhao anqi 2026-03-22 15/750 2026-03-25 12:51 by wht0531
[考研] 306求0703调剂一志愿华中师范 +10 纸鱼ly 2026-03-21 11/550 2026-03-24 17:22 by qingfeng258
[基金申请] 请教下大家 2026年国家基金申请是双盲审吗? +3 lishucheng1 2026-03-22 5/250 2026-03-24 08:22 by gltch
[考研] 269求调剂 +4 我想读研11 2026-03-23 4/200 2026-03-23 21:25 by pswait
[论文投稿] 急发核心期刊论文 +3 贤达问津 2026-03-23 5/250 2026-03-23 17:13 by 妹子不好惹
[考研] 336求调剂 +5 rmc8866 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:24 by 学员8dgXkO
信息提示
请填处理意见