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lybio金虫 (正式写手)
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平端连接后鉴定方向的问题
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| 实验中先用中间载体（载体中已连接一个基因片断，此基因片断中间有个酶切位点，酶切后与另一个DNA片断平端连接）上的引物P1、P4（即为已连接基因的 两端引物）和DNA片断引物P2、P3扩增质粒（六个菌液PCR为阳性的菌液中抽提的质粒），可得到预期片断（分别为3.0kb和1.0kb），验证了片断已经与载体连接上了。再通过载体的引物P1和片断的引物P3，以及片断引物P2和载体的引物P4分别扩增质粒，电泳结果用载体的引物P1和片断的引物P3都无P出条带，用片断引物P2和载体的引物P4扩增，四个质粒有条带，按常理说，只要有条带，不就证实连接方向正确嘛，如果连接方向不对，根本P不出条带。但问题是它们扩增的条带片断为0.9kb，不是预期片断大小2.0kb。想请教大伙出现这现象的原因，和其他鉴定方向的方法 |
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