| 查看: 1173 | 回复: 4 | ||
[求助]
克隆活化小提质粒相关问题 已有1人参与
|
|
一年多以前，克隆时挑一个白菌落到氨苄浓度为100μg/mL的LB培养基里摇菌，菌液测序后加甘油15%保存在-80℃，中途-80℃冰箱出故障，质粒有在低于-80℃保存过1天后转移到-20℃，现在想要活化质粒，有几个问题想要请教大家： （1）质粒保存低于-80℃（具体多少不知道）有影响吗？ （2）活化时我看有人说需要划线挑菌摇菌，我想请问可以直接加甘油菌液到LB培养基里摇菌吗？LB里需要加氨苄吗？氨苄浓度还是多少呢？时间太久，质粒上的氨苄抗性会不会丢失，加了氨苄会不会长不出？ （3）活化摇菌的转速时间多少呢?我有看到说最好控制在对数期内，13~16h，因为我们只有低转速的摇床，130rpm的话摇过夜（18h以上）可以吗？ 综上，就是想问一下质粒活化的操作方法，希望能详细解答一下~刚开始做这部分，还请大家多多指教~ |
回复此楼» 猜你喜欢
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有299人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有1人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 转染实验要注意的一些问题
已经有8人回复
- 【求助/交流】菌液PCR的经验
已经有6人回复
lifechuteng
新虫 (小有名气)
- 应助: 62 (初中生)
- 金币: 504.5
- 红花: 12
- 帖子: 143
- 在线: 38.5小时
- 虫号: 3948241
- 注册: 2015-07-01
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
①无影响，而且建议低温保存，但是要避免反复冻融。 ②可以直接加甘油菌液到LB培养基，但前提是甘油管菌种要品质良好。若容易染菌，则需挑单克隆。活化时要加抗生素的，100μg/mL浓度就可以，我也是用的这个浓度。时间很久的话也要加抗生素，可能某些菌体丢失质粒而失去抗性长不出（不是质粒上抗性丢失，而是丢失质粒），但这不就是加氨苄抗生素的目的吗？将含有质粒的菌培养出来。 ③低转速的摇床就可以的，这个影响的是培养基的含氧量，不过不是特别重要。 总之，我活化质粒就是将之前-80保存的甘油菌在抗性培养基中按1%量加入，培养过夜，第二天抽质粒。 另外，我还会在-80度单独保存一管质粒，以防这个甘油菌出现什么问题~这样我可以再做一次转化就好了~ |
angiexx2楼2016-01-15 14:54:59
3楼2016-01-15 15:51:35
4楼2016-01-16 12:32:29
jinghonglxt
金虫 (著名写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2046.4
- 散金: 1638
- 红花: 13
- 沙发: 4
- 帖子: 1882
- 在线: 216.7小时
- 虫号: 6335172
- 注册: 2017-04-17
- 性别: MM
- 专业: 观赏园艺学
5楼2017-11-21 13:38:57
