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921206

新虫 (初入文坛)

[交流] 原核基因敲除 已有3人参与

最近刚开始做原核敲除,对质粒进行PCR后DpnI消除模板,结果会有两条带,暂且命名为上,和DpnI消化产物,对其都回收后发现bp相近,那哪个是消化好的呢?求大神指教,图1左200bp DNA ladder,DpnI消化产物,双酶切。图2左MAKER,DpnI胶回收,酶切回收,上回收

原核基因敲除


原核基因敲除-1


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原海亮

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 921206 at 2016-01-15 13:09:53
是用Cas9敲的吗?
...

没用过,不过敲除常用原理不就是同源重组嘛,你PCR扩增质粒的目的是干嘛?

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天空才是极限,我有信心飞的更高!
9楼2016-01-15 17:06:11
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原海亮

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
楼主对质粒进行PCR是要做扩环点突变么?

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天空才是极限,我有信心飞的更高!
2楼2016-01-15 09:28:41
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921206

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-01-15 09:28:41
楼主对质粒进行PCR是要做扩环点突变么?

没接触过扩环点突变,用带有NGG序列引物对质粒扩增的,问一下,你做敲除吗

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3楼2016-01-15 12:30:22
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原海亮

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 921206 at 2016-01-15 12:30:22
没接触过扩环点突变,用带有NGG序列引物对质粒扩增的,问一下,你做敲除吗
...

做过敲除,只是不太懂你这些操作和基因敲除的关系,倒和我们经常做的点突变挺像

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天空才是极限,我有信心飞的更高!
4楼2016-01-15 12:31:53
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