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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 用的clontech RACE试剂盒，做不出来结果。跪求大家看看是我设计的引物有问题吗？
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张胜博

新虫 (初入文坛)

[求助] 用的clontech RACE试剂盒，做不出来结果。跪求大家看看是我设计的引物有问题吗？ 已有4人参与

GGCCGAAGCGGAAGTGCCACGACCACGCGCACTCCGAGAACGTCGCCGGC
GCCTCCGGTGGCCGCTGCCACTGCTCCAAGCGCAGGAAGTCCCGTGTGAA
GCGGATGACCCGCGTTCCGGCGATCAGCTCGAAGGCGGCGGAGATCCCCG
CGGACGACTTCTCGTGGCGCAAGTACGGGCAGAAGCCCATCAAGGGCTCC
CCCTACCCACGAGGCTACTACAAGTGCAGCACGGTGCGCGGTTGCCCGGC
GCGGAAGCACGTGGAGCGCGACCCCAGCGACCCGTCCATGCTCATCGTGA
CCTACGAGGGCGACCACCGCCACACCCCCGGCGACCAGGAACCGGCGGCG
GCGCTCACCCCGCTCCCGGAGCTGCACAAGCTCTGACTGAAGCTTCTTTC
TACCCACCGCTACTACACCGACCTGTTAATTAATTAATTAAAACTTAGCC
TGTCATGCTGTTCCCTTTGTCGCCGTATAGTAGTAGCTAGAGTTTCTTTT
TCTTTTTTGTTTGGTCGCTCGATCGATCCAGTGTATTAGTAGCAGCATGT
AAAAGAATGAGCAACTTAGGGAAGCTTTGAGCAGCTTTGGTCGGAGAAGA
AGAAAGAAGCGAGCGAAAGAAAAAGACGCGCAACTGCTCGTAGTTTTGAC
TGCAAA
这是基因序列片段，做的3RACE，我设计的GSP2引物序列为TGCTGTTCCCTTTGTCGCCGTAT  跪求大家看一看啊
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1楼 2016-01-14 20:59:36
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prthefu

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

首先，我也是新手，刚做这方面。所以针对你的问题，我只是单纯发表一下我自己的理解。
你贴出了基因的部分序列，一般默认方向为5-3，所以，我在你这段序列（656bp）中先查找ORF,但是，得到的结果如下图1.我找到的是后面的终止密码子，但前面的起始密码子没有，所以，你要做的不应该是5'-race吗？为什么你要做3呢？
用的clontech RACE试剂盒，做不出来结果。跪求大家看看是我设计的引物有问题吗？
图1阅读框查找.jpg
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20楼2016-04-09 21:26:34
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Harper_sun

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
带了特定的15个碱基了没？

发自小木虫Android客户端
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2楼2016-01-14 21:43:14
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Harper_sun

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

是不是用的SMART试剂盒？？

发自小木虫Android客户端
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3楼2016-01-14 21:43:45
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张胜博

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Harper_sun at 2016-01-14 21:43:45
是不是用的SMART试剂盒？？

是的，就按要求设计的。可是做不出来，怀疑是引物设计的不好
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4楼2016-01-15 18:26:22
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