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张胜博

新虫 (初入文坛)

[求助] 用的clontech RACE试剂盒,做不出来结果。跪求大家看看是我设计的引物有问题吗? 已有4人参与

GGCCGAAGCGGAAGTGCCACGACCACGCGCACTCCGAGAACGTCGCCGGC
GCCTCCGGTGGCCGCTGCCACTGCTCCAAGCGCAGGAAGTCCCGTGTGAA
GCGGATGACCCGCGTTCCGGCGATCAGCTCGAAGGCGGCGGAGATCCCCG
CGGACGACTTCTCGTGGCGCAAGTACGGGCAGAAGCCCATCAAGGGCTCC
CCCTACCCACGAGGCTACTACAAGTGCAGCACGGTGCGCGGTTGCCCGGC
GCGGAAGCACGTGGAGCGCGACCCCAGCGACCCGTCCATGCTCATCGTGA
CCTACGAGGGCGACCACCGCCACACCCCCGGCGACCAGGAACCGGCGGCG
GCGCTCACCCCGCTCCCGGAGCTGCACAAGCTCTGACTGAAGCTTCTTTC
TACCCACCGCTACTACACCGACCTGTTAATTAATTAATTAAAACTTAGCC
TGTCATGCTGTTCCCTTTGTCGCCGTATAGTAGTAGCTAGAGTTTCTTTT
TCTTTTTTGTTTGGTCGCTCGATCGATCCAGTGTATTAGTAGCAGCATGT
AAAAGAATGAGCAACTTAGGGAAGCTTTGAGCAGCTTTGGTCGGAGAAGA
AGAAAGAAGCGAGCGAAAGAAAAAGACGCGCAACTGCTCGTAGTTTTGAC
TGCAAA
这是基因序列片段,做的3RACE,我设计的GSP2引物序列为TGCTGTTCCCTTTGTCGCCGTAT  跪求大家看一看啊
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Harper_sun

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 张胜博 at 2016-01-15 18:33:03
买的就是全套的CLONTECH的,这个效果比takara的好我都做不出来。用takara更做不出来了,新手一枚。...

一般不会是引物设计的问题,如果你的第一链cDNA反转的没有问题,用Clontech的试剂盒很容易扩出来的。。给张你的PCR电泳图看看,是完全没有条带还是说你条带回收了,连接转化后测序是错误序列??如果TouchdownPCR没有条带可以试试最后一步降低退火到65度。。试剂盒的说明书里有详细说明。

发自小木虫Android客户端
13楼2016-01-18 17:35:04
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查看全部 22 个回答

Harper_sun

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
带了特定的15个碱基了没?

发自小木虫Android客户端
2楼2016-01-14 21:43:14
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Harper_sun

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

是不是用的SMART试剂盒??

发自小木虫Android客户端
3楼2016-01-14 21:43:45
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张胜博

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Harper_sun at 2016-01-14 21:43:45
是不是用的SMART试剂盒??

是的,就按要求设计的。可是做不出来,怀疑是引物设计的不好
4楼2016-01-15 18:26:22
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