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无缝克隆连接2个片段，如何设计引物？载体使用puc21.详细... 已有1人参与
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无缝克隆连接2个片段，如何设计引物？载体使用puc21.详细说明一下。 @biostar2009 发自小木虫Android客户端 |
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2楼2016-01-14 02:31:03
3楼2016-01-14 08:16:14
lifechuteng
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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采用引物中引入同源臂的方法，通过PCR将同源臂扩增到产物的两侧。 方法很简单，这里举个例子，（用阿拉伯数字和汉字数字来表示碱基，每个数字代表5个碱基） 例如： gene序列：1234…………5678 载体序列： …………一二三四五六七八………… 要将gene片段扩增到“四”和“五”之间。 设计引物，先在word中，将一二三四放到1234前面，五六七八放到5678后面，就是如下序列： 一二三四1234…………5678五六七八 然后正向引物就是：一二三四1234 反向引物就是5678五六七八的反向互补。 这两个引物就会将20bp的同源臂加到gene产物中。 |
4楼2016-01-14 08:59:35
5楼2016-01-14 11:21:18
lifechuteng
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6楼2016-01-14 12:34:49
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你给分析下：第一片段正向引物：上游载体的同源序列+第一片段正向序列。 第一片段反向引物：第一片段反向序列+第二片段反向序列 第二片段正向引物：第二片段的正向序列+第一片段的正向 第二片段的反向引物：第二片段的反向序列+载体下游反向序列。 是不是这样啊？忘讲解 @biostar2009 发自小木虫Android客户端 |
7楼2016-01-14 13:06:45
8楼2016-04-24 09:31:06