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天心tianxin

铁虫 (初入文坛)

[求助] GFP不发光 已有5人参与

构建1300GFP载体，测序筛得苗后，得到的植株却不发光，这是为什么呢
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1楼 2016-01-09 16:01:57
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
测序结果除了GFP外，启动子和终止子的编码和阅读框正确么？另外你怎么检测植株的？
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
2楼2016-01-09 22:37:56
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suitime

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你是用什么光源激发的？很多人拿紫外光源激发，看不到荧光，推荐你用一种luyor-3260b蓝光光源激发看看
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3楼2016-01-09 22:51:00
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普通回帖

yuzhiming

捐助贵宾 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
转的是什么植物？
如果是模式植物，应该都有的，只要问问人家要下，一般都能够给。
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4楼2016-01-11 14:41:45
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天心tianxin

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2016-01-09 22:37:56
测序结果除了GFP外，启动子和终止子的编码和阅读框正确么？另外你怎么检测植株的？

检测荧光是在激光共聚焦下看是否有荧光啊
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5楼2016-01-12 20:30:23
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天心tianxin

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yuzhiming at 2016-01-11 14:41:45
转的是什么植物？
如果是模式植物，应该都有的，只要问问人家要下，一般都能够给。

转的是拟南芥啊
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6楼2016-01-12 20:31:38
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yuzhiming

捐助贵宾 (知名作家)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 天心tianxin at 2016-01-12 20:31:38
转的是拟南芥啊...

这个很多实验室有，问人家要吧。不用自己转基因的
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7楼2016-01-12 21:52:43
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天心tianxin

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by yuzhiming at 2016-01-12 21:52:43
这个很多实验室有，问人家要吧。不用自己转基因的...

是要把自己的基因连接在带GFP的载体上，在对拟南芥进行侵染的
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8楼2016-01-13 20:59:32
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yuzhiming

捐助贵宾 (知名作家)
那只能自己构建了。

发自小木虫Android客户端
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9楼2016-01-14 08:01:31
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sun_in_night

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

筛到植株有可能是假阳性的，又或者是表达量太低，可以做一个RT-PCR看看有没有GFP表达（假设载体构建没有问题）。一般都会多筛好几个植株。
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10楼2016-01-15 04:08:38
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