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实时荧光定量RT-PCR实验流程 已有4人参与
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2016-01-09 11:53:41, 47.5 K
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一 样本总类及样本处理要求： 1 新鲜组织：切割标本后放于液氮或者-80℃冰箱保存，也可以直接将适量待测样本置于trizol中在置于液氮或者-80℃冰箱保存。 2石蜡标本：常温保存； 3全血标本：取适量全血加入EDTA或肝素抗凝采血管，4度保存；或者全血分离单核细胞，液氮或者 -80℃冰箱保存 4体液标本：高速离心取沉淀； 5细胞标本：细胞加TRizol裂解后液氮或者-80℃冰箱保存。 二 操作步骤（了解） (一)组织总RNA的抽提 1 将所试验的标本按序排放在管架 2 依次将各组组织100mg(米粒大小)转移至5ml玻璃试管中,依次每一管中加入1ml Trizol(预冷) 电动匀浆器(转速8000r/min)处理30~45秒.每标本间处理后用酒精(75%乙醇的配置:1倍的DEPC处理水加3倍的无水乙醇)棉球擦拭, DEPC处理水清洗. 3 依次将匀浆液转至1.5mlEppendorf管中，加入预冷的氯仿200ul,振荡摇匀15秒4℃,12000r/min, 离心15分钟. 4小心吸出水层加入依次编号的Eppendorf管中,再加入二倍体积预冷的异丙醇(约600 ul),混匀,置于-20℃冰箱,30分钟. |
20楼2016-03-02 17:07:57
2楼2016-01-09 12:02:55
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3楼2016-01-09 13:29:50
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4楼2016-01-09 15:06:17