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跟达尔文旅行

铜虫 (小有名气)

[求助] 做液相前样品除蛋白方法已有3人参与

请问做液相前,有什么好的方法可以除掉样品中的蛋白,但又不会很大的稀释样品?
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harbingeryg

金虫 (小有名气)

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经典的 有机溶剂或者酸水溶液的直接蛋白沉淀,与水不互溶的溶剂对目标物液液萃取,然后挥干复溶,固相萃取小柱处理后挥干复溶,超滤,透析等

发自小木虫Android客户端
2楼2016-01-08 21:38:24
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野狗般战斗着

铁虫 (小有名气)

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固相萃取可以完全除去,但是比较麻烦,需要自己去找合适的柱子和条件,一般情况下可以加点tfa,然后万转离心机离心,取上层液体过滤,这个比较简单点
3楼2016-01-09 18:21:13
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klicking

至尊木虫 (著名写手)

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如3楼所言,一般是加入沉淀剂沉淀后离心,沉淀剂可能要删选一下,找到效果较好的。
归零
4楼2016-01-10 08:43:36
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跟达尔文旅行

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 野狗般战斗着 at 2016-01-09 18:21:13
固相萃取可以完全除去,但是比较麻烦,需要自己去找合适的柱子和条件,一般情况下可以加点tfa,然后万转离心机离心,取上层液体过滤,这个比较简单点

样品中加了三氟乙酸后呈酸性,上样后对C18柱会有影响吗?10微升进样量
5楼2016-01-10 08:56:45
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跟达尔文旅行

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by klicking at 2016-01-10 08:43:36
如3楼所言,一般是加入沉淀剂沉淀后离心,沉淀剂可能要删选一下,找到效果较好的。

有哪些常用蛋白沉淀剂呢
6楼2016-01-10 08:57:50
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klicking

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 跟达尔文旅行 at 2016-01-10 08:57:50
有哪些常用蛋白沉淀剂呢...

这个百度一搜就很多的啦,关键要看是否适用于您的目的。
1.加热,大部分蛋白质在温度超过60摄氏度以上会变性,沉淀.
2.盐析法沉淀:硫酸铵分级盐析法,蛋白质疏水集团暴露,沉淀.
3.等电点沉淀法:配置磷酸盐缓冲液,tris盐酸缓冲液等,当pH为等电点时,蛋白质沉淀.
4.有机溶剂:丙酮、乙醇、甲醇等。
5.表面活性剂,去垢剂等:SDS,Tween 100,Span 85等.
6.变性剂:盐酸胍等

个人觉得如果进液相的话,有机溶剂沉淀法比较靠谱。通常首选能和水混溶的有机溶剂,使用较多的有机溶剂是乙醇、甲醇、丙酮,还有二甲基甲酰胺、二甲基亚砜和乙腈等。
归零
7楼2016-01-10 09:11:05
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goodluc

新虫 (小有名气)

内容已删除
8楼2016-01-10 09:14:58
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