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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 做液相前样品除蛋白方法
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跟达尔文旅行

铜虫 (小有名气)

[求助] 做液相前样品除蛋白方法 已有3人参与

请问做液相前，有什么好的方法可以除掉样品中的蛋白，但又不会很大的稀释样品？
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1楼 2016-01-08 20:12:51
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harbingeryg

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
经典的 有机溶剂或者酸水溶液的直接蛋白沉淀，与水不互溶的溶剂对目标物液液萃取，然后挥干复溶，固相萃取小柱处理后挥干复溶，超滤，透析等

发自小木虫Android客户端
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2楼2016-01-08 21:38:24
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野狗般战斗着

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
固相萃取可以完全除去，但是比较麻烦，需要自己去找合适的柱子和条件，一般情况下可以加点tfa，然后万转离心机离心，取上层液体过滤，这个比较简单点
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3楼2016-01-09 18:21:13
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klicking

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如3楼所言，一般是加入沉淀剂沉淀后离心，沉淀剂可能要删选一下，找到效果较好的。
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归零
4楼2016-01-10 08:43:36
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跟达尔文旅行

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 野狗般战斗着 at 2016-01-09 18:21:13
固相萃取可以完全除去，但是比较麻烦，需要自己去找合适的柱子和条件，一般情况下可以加点tfa，然后万转离心机离心，取上层液体过滤，这个比较简单点

样品中加了三氟乙酸后呈酸性，上样后对C18柱会有影响吗？10微升进样量
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5楼2016-01-10 08:56:45
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跟达尔文旅行

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by klicking at 2016-01-10 08:43:36
如3楼所言，一般是加入沉淀剂沉淀后离心，沉淀剂可能要删选一下，找到效果较好的。

有哪些常用蛋白沉淀剂呢
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6楼2016-01-10 08:57:50
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klicking

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 跟达尔文旅行 at 2016-01-10 08:57:50
有哪些常用蛋白沉淀剂呢...

这个百度一搜就很多的啦，关键要看是否适用于您的目的。
1.加热,大部分蛋白质在温度超过60摄氏度以上会变性,沉淀.
2.盐析法沉淀：硫酸铵分级盐析法,蛋白质疏水集团暴露,沉淀.
3.等电点沉淀法：配置磷酸盐缓冲液,tris盐酸缓冲液等,当pH为等电点时,蛋白质沉淀.
4.有机溶剂：丙酮、乙醇、甲醇等。
5.表面活性剂,去垢剂等：SDS,Tween 100,Span 85等.
6.变性剂：盐酸胍等

个人觉得如果进液相的话，有机溶剂沉淀法比较靠谱。通常首选能和水混溶的有机溶剂，使用较多的有机溶剂是乙醇、甲醇、丙酮，还有二甲基甲酰胺、二甲基亚砜和乙腈等。
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归零
7楼2016-01-10 09:11:05
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goodluc

新虫 (小有名气)
内容已删除
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8楼2016-01-10 09:14:58
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