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曾经的大熊

新虫 (初入文坛)

[求助] Ellman’s方法检测蛋白质游离巯基 已有1人参与

Ellman’s方法检测蛋白质游离巯基具体实验方法和步骤啊谢谢了

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D1ngX1n

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-07-31 08:12:19
准确称量30mg的蛋白样品,溶解在10mL的Tris-Gly缓冲液(0.086M Tris,0.09M Gly甘氨酸(氨基乙酸)和pH 8.0,0.04M EDTA),使里面的巯基完全暴露,然后加入0.1ml DTNB(5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)用于检测游离的巯基(-SH),此时也称作Ellman试剂)溶液,在室温避光的条件下震荡1h,5000g离心10min,在波长412nm下测定吸光度。
巯基(-SH)含量的计算公式如下:
游离巯基含量(μmol/g)=73.53×A412×D/C
A412-吸光值;D-稀释倍数,1.01;C-蛋白浓度(mg/mL)
1.36×104——TNBA(Elman试剂与巯基反应所生成的5-硫代-2-硝基苯甲酸(盐)阴离子)的摩尔消光系数,单位为L/mol系数。
2楼2016-07-29 16:57:26
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xiexie谢

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by D1ngX1n at 2016-07-29 16:57:26
准确称量30mg的蛋白样品,溶解在10mL的Tris-Gly缓冲液(0.086M Tris,0.09M Gly甘氨酸(氨基乙酸)和pH 8.0,0.04M EDTA),使里面的巯基完全暴露,然后加入0.1ml DTNB(5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)用于检测游离的 ...

请问蛋白浓度C是用30mg除以10ml吗?
“1.36×104——TNBA(Elman试剂与巯基反应所生成的5-硫代-2-硝基苯甲酸(盐)阴离子)的摩尔消光系数,单位为L/mol系数。”请问这句话是什么意思呢?我看公式里好像没有代表这个数值的字母
3楼2022-05-30 17:40:29
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a568857414

新虫 (初入文坛)

稀释倍数的意思就是说我稀释了多少倍吗?
4楼2023-04-27 09:16:51
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