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曾经的大熊新虫 (初入文坛)
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Ellman’s方法检测蛋白质游离巯基 已有1人参与
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Ellman’s方法检测蛋白质游离巯基具体实验方法和步骤啊谢谢了 发自小木虫Android客户端 |
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【答案】应助回帖
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xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-07-31 08:12:19
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-07-31 08:12:19
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准确称量30mg的蛋白样品，溶解在10mL的Tris-Gly缓冲液（0.086M Tris，0.09M Gly甘氨酸（氨基乙酸）和pH 8.0,0.04M EDTA），使里面的巯基完全暴露，然后加入0.1ml DTNB（5,5'-二硫代双（2-硝基苯甲酸）用于检测游离的巯基(-SH)，此时也称作Ellman试剂）溶液，在室温避光的条件下震荡1h，5000g离心10min，在波长412nm下测定吸光度。 巯基（-SH）含量的计算公式如下： 游离巯基含量（μmol/g）=73.53×A412×D/C A412-吸光值；D-稀释倍数，1.01；C-蛋白浓度（mg/mL） 1.36×104——TNBA（Elman试剂与巯基反应所生成的5-硫代-2-硝基苯甲酸（盐）阴离子）的摩尔消光系数，单位为L/mol系数。 |
2楼2016-07-29 16:57:26
3楼2022-05-30 17:40:29
4楼2023-04-27 09:16:51