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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » Ellman’s方法检测蛋白质游离巯基
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曾经的大熊

新虫 (初入文坛)

[求助] Ellman’s方法检测蛋白质游离巯基 已有1人参与

Ellman’s方法检测蛋白质游离巯基具体实验方法和步骤啊谢谢了

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1楼 2016-01-06 18:14:32
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D1ngX1n

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-07-31 08:12:19
准确称量30mg的蛋白样品，溶解在10mL的Tris-Gly缓冲液（0.086M Tris，0.09M Gly甘氨酸（氨基乙酸）和pH 8.0,0.04M EDTA），使里面的巯基完全暴露，然后加入0.1ml DTNB（5,5'-二硫代双（2-硝基苯甲酸）用于检测游离的巯基(-SH)，此时也称作Ellman试剂）溶液，在室温避光的条件下震荡1h，5000g离心10min，在波长412nm下测定吸光度。
巯基（-SH）含量的计算公式如下：
游离巯基含量（μmol/g）=73.53×A412×D/C
A412-吸光值；D-稀释倍数，1.01；C-蛋白浓度（mg/mL）
1.36×104——TNBA（Elman试剂与巯基反应所生成的5-硫代-2-硝基苯甲酸（盐）阴离子）的摩尔消光系数，单位为L/mol系数。
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2楼2016-07-29 16:57:26
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xiexie谢

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by D1ngX1n at 2016-07-29 16:57:26
准确称量30mg的蛋白样品，溶解在10mL的Tris-Gly缓冲液（0.086M Tris，0.09M Gly甘氨酸（氨基乙酸）和pH 8.0,0.04M EDTA），使里面的巯基完全暴露，然后加入0.1ml DTNB（5,5'-二硫代双（2-硝基苯甲酸）用于检测游离的 ...

请问蛋白浓度C是用30mg除以10ml吗？
“1.36×104——TNBA（Elman试剂与巯基反应所生成的5-硫代-2-硝基苯甲酸（盐）阴离子）的摩尔消光系数，单位为L/mol系数。”请问这句话是什么意思呢?我看公式里好像没有代表这个数值的字母
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3楼2022-05-30 17:40:29
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a568857414

新虫 (初入文坛)
稀释倍数的意思就是说我稀释了多少倍吗？
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4楼2023-04-27 09:16:51
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