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柚小西

新虫 (初入文坛)

[求助] 最近要合成一个complete cds的α-amylase全... 已有2人参与

最近要合成一个complete cds的α-amylase全基因(GenBank号fj859877),在关于这个基因的相关title中发现这位作者是为了能够将a一淀粉酶表达盒片段转化到米曲霉中,构建了重组载体pBC一hygro-ITS-amy,全长为10.4kb。重组载体中,a一淀粉酶表达盒序列连接到了ITS序列中间,形成了一条融合
序列,载体带有HygromycinB磷酸转移酶表达盒,可以用于筛选米曲霉转化子。
我的问题是:为什么要将α-淀粉酶连接到ITS序列的中间,ITS序列不是鉴定菌种用的吗?并且作者就是从米曲霉中克隆得到了α-淀粉酶表达盒的呢。这是什么原理呢?为了成功表达α-淀粉酶,一定要连接ITS序列融合吗?我的宿主是毕赤酵母,表达载体也是酵母表达载体, 那我是否需要为了成功表达此基因,加α-淀粉酶连接上ITS序列呢?

此基因在NCBI中http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/fj859877   显示了信号肽和成熟肽,还有CDS,还有mRNA,我合成全基因是需要合成成熟肽序列就能成功表达了吗(我的毕赤酵母载体上有信号肽序列)?这个基因有9个外显子和8个内含子,只需要合成外显子就够了吗?
多多指教呢。 @wizardfan

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hmtpe

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

只需合成外显子就行。或者直接把成熟肽的氨基酸序列发给基因合成公司就行。

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2楼2016-01-21 09:01:24
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a13515517892

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

一般只是需要合成cds区即可的
3楼2016-01-21 13:56:38
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)


这个太简单了,需要删除信号太才行

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4楼2016-01-21 17:27:40
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