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迷你骑士

新虫 (初入文坛)

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[求助] 淀粉凝胶电泳具体方法！！！

各位大神，本人最近参考文献做血红蛋白的淀粉凝胶电泳（其他电泳均试过不能满足要求，只好照文献做，知道这种方法已经很少人用）
有谁做过这种电泳，我想问几个问题：
a）淀粉我用的是国产标注用于电泳的马铃薯淀粉，按照不水解用可溶性淀粉混合的方法（14:5 、1:1、5:14都试过了），均成胶效果差，凝胶软没有弹性，齿梳一拔掉直接坏掉，跟稀饭一样，很苦恼，希望虫友不吝赐教！
b）蛋白上样，为了不漂孔，用了甘油，另外还有pH8.8的buffer，按道理蛋白应该带上负电荷，电泳过程中向正极移动，但是我的样品在电压110V（~6V/cm2)下，2小时也只运动了半个厘米。文献中用的上样方法是用滤纸条吸取蛋白液插入样品孔（但是没有提蛋白用了什么buffer），想问问做过的大神知道解决这个问题！！！
c）跑完后的染色，我用的是考马斯亮蓝，理论上也是可以染的，但是染色后很难脱色，毕竟胶比较厚，文献用氨基黑10B，理论灵敏度不及考马斯亮蓝。想问问大神用啥染用啥脱色！！
以上问题希望得到大家的解答，即使没做过也可以根据理解给个建议，我在此先谢过了！！

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1楼 2016-01-06 08:59:03

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