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梦的金色城堡

新虫 (小有名气)

[求助] 有关大肠杆菌western bloting.做了两次了,还是膜上什么也没有 已有2人参与

做了蛋白iptg表达,用考马斯亮蓝染色,可是结果并不明显,我的目的蛋白是26.然后是做wb确定一下,用的半干转,DAB显色,但是我做了两次了还是没有任何条带,之前学妹做的其他蛋白,有条带出来,所以我用的东西应该没有问题。marker有条带,但是好像没有什么背景,也没有用内参,不知道是什么原因?是根本没有诱导出来,还是步骤错了,还是蛋白转过了还是没转上…?有没有懂的帮忙分析一下吧,谢谢,不胜感激~~失落中

有关大肠杆菌western bloting.做了两次了,还是膜上什么也没有


有关大肠杆菌western bloting.做了两次了,还是膜上什么也没有-1


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生物-医药
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wuchh123

禁虫 (初入文坛)

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8楼2016-01-08 11:58:25
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梦的金色城堡

新虫 (小有名气)

我的蛋白最靠近marker的那个是空白对照…

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生物-医药
2楼2016-01-04 22:37:38
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黄腾

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
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梦的金色城堡: 金币+2, 有帮助 2016-01-25 15:38:08
首先,marker出了条带,那就一定是转上了,26的分子量还是比较小,电泳时间可以再短一点,我是做也是做半干转的,确定一个内参再做还是比较好,你也可以确定一下抗体有没有问题,加一个确定已表达的样品做对照,或者是点一个合成蛋白样品,就是你们做抗体用的蛋白。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

3楼2016-01-05 19:00:21
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梦的金色城堡

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 黄腾 at 2016-01-05 19:00:21
首先,marker出了条带,那就一定是转上了,26的分子量还是比较小,电泳时间可以再短一点,我是做也是做半干转的,确定一个内参再做还是比较好,你也可以确定一下抗体有没有问题,加一个确定已表达的样品做对照,或者 ...

好的,谢谢你,我明天再做一次。我学妹的蛋白表达比较高,她也用的一抗1:1000,转45分钟,有条带。我的会不会是表达低所以没有呢?今天又配了一抗1:500打算试试,电转时间应该多少合适呢,蛋白26转了45分钟,marker正反面都有,会不会是转跑啦?

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生物-医药
4楼2016-01-05 20:28:25
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