应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 有关大肠杆菌western bloting.做了两次了，还是膜上什么也没有
121/2返回列表12下一页
查看: 1708  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

梦的金色城堡

新虫 (小有名气)

[求助] 有关大肠杆菌western bloting.做了两次了，还是膜上什么也没有 已有2人参与

做了蛋白iptg表达，用考马斯亮蓝染色，可是结果并不明显，我的目的蛋白是26.然后是做wb确定一下，用的半干转，DAB显色，但是我做了两次了还是没有任何条带，之前学妹做的其他蛋白，有条带出来，所以我用的东西应该没有问题。marker有条带，但是好像没有什么背景，也没有用内参，不知道是什么原因？是根本没有诱导出来，还是步骤错了，还是蛋白转过了还是没转上…？有没有懂的帮忙分析一下吧，谢谢，不胜感激～～失落中

有关大肠杆菌western bloting.做了两次了，还是膜上什么也没有


有关大肠杆菌western bloting.做了两次了，还是膜上什么也没有-1


发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
生物-医药
1楼 2016-01-04 22:27:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

黄腾

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
梦的金色城堡: 金币+2, ★有帮助 2016-01-25 15:38:08
首先，marker出了条带，那就一定是转上了，26的分子量还是比较小，电泳时间可以再短一点，我是做也是做半干转的，确定一个内参再做还是比较好，你也可以确定一下抗体有没有问题，加一个确定已表达的样品做对照，或者是点一个合成蛋白样品，就是你们做抗体用的蛋白。
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

梦的金色城堡
3楼2016-01-05 19:00:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

梦的金色城堡

新虫 (小有名气)
我的蛋白最靠近marker的那个是空白对照…

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
生物-医药
2楼2016-01-04 22:37:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梦的金色城堡

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 黄腾 at 2016-01-05 19:00:21
首先，marker出了条带，那就一定是转上了，26的分子量还是比较小，电泳时间可以再短一点，我是做也是做半干转的，确定一个内参再做还是比较好，你也可以确定一下抗体有没有问题，加一个确定已表达的样品做对照，或者 ...

好的，谢谢你，我明天再做一次。我学妹的蛋白表达比较高，她也用的一抗1:1000，转45分钟，有条带。我的会不会是表达低所以没有呢？今天又配了一抗1:500打算试试，电转时间应该多少合适呢，蛋白26转了45分钟，marker正反面都有，会不会是转跑啦？

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
生物-医药
4楼2016-01-05 20:28:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黄腾

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 梦的金色城堡 at 2016-01-05 20:28:25
好的，谢谢你，我明天再做一次。我学妹的蛋白表达比较高，她也用的一抗1:1000，转45分钟，有条带。我的会不会是表达低所以没有呢？今天又配了一抗1:500打算试试，电转时间应该多少合适呢，蛋白26转了45分钟，marke ...

你可以在一个泳道点一你学妹的样品，如果她的有条带而你的没有那就是没表达或没表达，marker不知道你用的是什么膜，一般是不会转到反面的
赞一下 回复此楼
5楼2016-01-05 21:37:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuchh123

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
6楼2016-01-06 09:49:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

haze12344

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by wuchh123 at 2016-01-06 09:49:26
大肠杆菌的蛋白我怎么总是提取不出来啊？做SDS_PAGE总是没有条带

很好提啊，收菌后直接加2x loading溶解，再煮沸就可以上样了
赞一下 回复此楼
生物你好
7楼2016-01-08 07:57:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuchh123

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
8楼2016-01-08 11:58:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梦的金色城堡

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 黄腾 at 2016-01-05 21:37:32
你可以在一个泳道点一你学妹的样品，如果她的有条带而你的没有那就是没表达或没表达，marker不知道你用的是什么膜，一般是不会转到反面的...

点了学妹的，有条带了，今天才知道我是用错了菌…我们导师在美国，我用的是克隆载体，做了两个月了才发现…呜呜我要哭了。谢谢你了

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
生物-医药
9楼2016-01-08 15:39:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梦的金色城堡

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by wuchh123 at 2016-01-06 09:49:26
大肠杆菌的蛋白我怎么总是提取不出来啊？做SDS_PAGE总是没有条带

你做考马斯亮蓝染色看看有没有高表达条带

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
生物-医药
10楼2016-01-08 15:40:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 梦的金色城堡 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 7/350 2026-11-01 12:45 by BCdvBAEpt3zm
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 8/400 2026-11-01 12:38 by BCdvBAEpt3zm
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 7/350 2026-11-01 12:27 by BCdvBAEpt3zm
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 16/800 2026-11-01 12:14 by BCdvBAEpt3zm
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 18/900 2026-11-01 12:11 by BCdvBAEpt3zm
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 5/250 2026-11-01 11:18 by Equinoxhua
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 5/250 2026-11-01 11:14 by BCdvBAEpt3zm
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 6/300 2026-11-01 11:09 by BCdvBAEpt3zm
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 4/200 2026-11-01 11:01 by BCdvBAEpt3zm
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 9/450 2026-11-01 10:56 by BCdvBAEpt3zm
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 6/300 2026-11-01 10:53 by BCdvBAEpt3zm
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 9/450 2026-11-01 10:53 by BCdvBAEpt3zm
[基金申请] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 14/700 2026-11-01 10:43 by BCdvBAEpt3zm
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 14/700 2026-11-01 07:01 by YXM1FDCSE8Bn
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 21/1050 2026-11-01 06:46 by YXM1FDCSE8Bn
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 15/750 2026-11-01 05:22 by YXM1FDCSE8Bn
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 12/600 2026-11-01 02:19 by YXM1FDCSE8Bn
[考博] 2027博士申请-临床检验诊断学、病原生物学、微生物方向 50+3 yyh@ 2026-10-28 4/200 2026-10-31 12:47 by 可淡不可忘
[硕博家园] 越来越担心硕士毕业后没有竞争力了 +8 zuesli 2026-10-27 14/700 2026-10-30 22:44 by 好运连连公主
[文学芳草园] 闲聊 +3 myrtle 2026-10-25 6/300 2026-10-29 15:28 by myrtle
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭