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有关大肠杆菌western bloting.做了两次了，还是膜上什么也没有 已有2人参与
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做了蛋白iptg表达，用考马斯亮蓝染色，可是结果并不明显，我的目的蛋白是26.然后是做wb确定一下，用的半干转，DAB显色，但是我做了两次了还是没有任何条带，之前学妹做的其他蛋白，有条带出来，所以我用的东西应该没有问题。marker有条带，但是好像没有什么背景，也没有用内参，不知道是什么原因？是根本没有诱导出来，还是步骤错了，还是蛋白转过了还是没转上…？有没有懂的帮忙分析一下吧，谢谢，不胜感激～～失落中  发自小木虫IOS客户端 |
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给自己回帖。很感谢大家的帮助，现在实验也算顺利了。3个月来失误很多，最大的失误是我用了两个月一直在做克隆菌，由于老师在美国，直到做了wb发给她看，才发现问题。两个月的时间完全是当练手法了。然后又做了两次表达菌，发现还是没有目的蛋白，当时要疯了，最后的探索就是把质粒提出来后酶切，发现有目的片段，然后做了感受态转化，，再提蛋白，发现全在沉淀里，好歹是有了，然后是用了半个月的时间摸索条件，就在昨天，大体积提取出来了目的蛋白，虽然不多，但是一切都有可能了，很开心，可以回家过个轻松的新年～为我的研一祝福吧^_^ 发自小木虫IOS客户端 |
11楼2016-01-25 15:58:57
2楼2016-01-04 22:37:38
3楼2016-01-05 19:00:21
送红花一朵 |
好的，谢谢你，我明天再做一次。我学妹的蛋白表达比较高，她也用的一抗1:1000，转45分钟，有条带。我的会不会是表达低所以没有呢？今天又配了一抗1:500打算试试，电转时间应该多少合适呢，蛋白26转了45分钟，marker正反面都有，会不会是转跑啦？ 发自小木虫IOS客户端 |
4楼2016-01-05 20:28:25