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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 手上有一个人源的蛋白需要纯化，但是很不稳定，全长的用多种方法...
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nadia926499

木虫 (小有名气)

[求助] 手上有一个人源的蛋白需要纯化，但是很不稳定，全长的用多种方法... 已有1人参与

手上有一个人源的蛋白需要纯化，但是很不稳定，全长的用多种方法纯化都会降解，造成没有活性。截短以后也会没有活性。用大肠杆菌表达可溶性也不是很好。所以比较苦恼，有没有什么好的办法去解决这种问题？ @hc-material

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1楼 2016-01-04 16:26:12
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nadia926499

木虫 (小有名气)
如果突变了蛋白中的半胱氨酸，会不会对本来的正确折叠造成影响，形成不一样的空间结构？

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3楼2016-01-05 08:23:19
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小小慧_amy

新虫 (初入文坛)
可以转到酵母表达 或者昆虫细胞。截短也要多试几个位置，或者突变蛋白中的半胱氨酸，尽量少形成二硫键

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2楼2016-01-05 00:39:31
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MarchZR

银虫 (小有名气)
用真核表达试试看，有些蛋白需要复杂修饰才能有活性，原核表达是可以保证可溶性蛋白的，包涵体也是可以成为可溶性蛋白，是不是上清就难说了，真核表达的话，酵母，哺乳动物细胞表达都可以
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4楼2016-01-05 14:01:15
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nadia926499

木虫 (小有名气)
用过细胞表达了，带了标签表达出来都不挂柱，估计直接断掉了

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5楼2016-01-05 16:55:24
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