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nadia926499

木虫 (小有名气)

[求助] 手上有一个人源的蛋白需要纯化,但是很不稳定,全长的用多种方法... 已有1人参与

手上有一个人源的蛋白需要纯化,但是很不稳定,全长的用多种方法纯化都会降解,造成没有活性。截短以后也会没有活性。用大肠杆菌表达可溶性也不是很好。所以比较苦恼,有没有什么好的办法去解决这种问题? @hc-material

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小小慧_amy

新虫 (初入文坛)

可以转到酵母表达 或者昆虫细胞。截短也要多试几个位置,或者突变蛋白中的半胱氨酸,尽量少形成二硫键

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2楼2016-01-05 00:39:31
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nadia926499

木虫 (小有名气)

如果突变了蛋白中的半胱氨酸,会不会对本来的正确折叠造成影响,形成不一样的空间结构?

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3楼2016-01-05 08:23:19
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MarchZR

银虫 (小有名气)

用真核表达试试看,有些蛋白需要复杂修饰才能有活性,原核表达是可以保证可溶性蛋白的,包涵体也是可以成为可溶性蛋白,是不是上清就难说了,真核表达的话,酵母,哺乳动物细胞表达都可以
4楼2016-01-05 14:01:15
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nadia926499

木虫 (小有名气)

用过细胞表达了,带了标签表达出来都不挂柱,估计直接断掉了

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5楼2016-01-05 16:55:24
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chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

去Uniprot上查找人家有提交的同源蛋白,应该会有做修饰或者截短的人,看看人家怎么做的
6楼2016-01-08 16:19:45
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