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南雪苏

新虫 (小有名气)

[求助] 酵母双杂交

我做酵母双杂交，在制备酵母感受态细胞AH109老是做不出来？求解啊附：液体培养基是YPDA
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1楼 2016-01-04 16:14:36
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20081118129

新虫 (著名写手)

Drake
你是哪个学校的啊，我是云南的！要方便的话想和你要点AH109.我没有，只有Y190.

发自小木虫IOS客户端
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10楼2016-03-18 08:00:52
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xpb2005

银虫 (小有名气)
你说的太简单了，详细的说说你做的过程，以及最后涂板后的生长结果？
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2楼2016-01-04 16:44:18
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南雪苏

新虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by xpb2005 at 2016-01-04 16:44:18
你说的太简单了，详细的说说你做的过程，以及最后涂板后的生长结果？

我是这样做的，首先在平板上挑取单克隆菌落在5毫升的YPDA中培养8-11小时，但是在接下来的步骤中，发现培养的菌落有臭味，根本没有酒香味，我怀疑是培养基的问题，但是又不知道是哪出了问题？
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3楼2016-01-04 16:56:26
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xpb2005

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 南雪苏 at 2016-01-04 16:56:26
我是这样做的，首先在平板上挑取单克隆菌落在5毫升的YPDA中培养8-11小时，但是在接下来的步骤中，发现培养的菌落有臭味，根本没有酒香味，我怀疑是培养基的问题，但是又不知道是哪出了问题？...

那这样的话，你是做到这步发现气味不对就没往下做，是吗？
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4楼2016-01-04 16:58:22
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南雪苏

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xpb2005 at 2016-01-04 16:58:22
那这样的话，你是做到这步发现气味不对就没往下做，是吗？...

是的
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5楼2016-01-04 16:58:44
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xpb2005

银虫 (小有名气)
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5楼: Originally posted by 南雪苏 at 2016-01-04 16:58:44
是的...

你的YPDA配方是？
取1毫升菌液离心，沉淀用水洗一次，离心，正常菌体沉淀是白色的，还有就是你在转接后，菌液生长的速度正常吗？
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6楼2016-01-04 17:07:31
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南雪苏

新虫 (小有名气)
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6楼: Originally posted by xpb2005 at 2016-01-04 17:07:31
你的YPDA配方是？
取1毫升菌液离心，沉淀用水洗一次，离心，正常菌体沉淀是白色的，还有就是你在转接后，菌液生长的速度正常吗？...

我的配方是：100ml  蛋白胨2g, 酵母提取物1g，灭菌15min，然后加5ml40%葡萄糖，0.75ml0.2%ADE，用灭菌的玻璃小平摇的，30度220rpm/min
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7楼2016-01-04 17:23:59
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南雪苏

新虫 (小有名气)
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6楼: Originally posted by xpb2005 at 2016-01-04 17:07:31
你的YPDA配方是？
取1毫升菌液离心，沉淀用水洗一次，离心，正常菌体沉淀是白色的，还有就是你在转接后，菌液生长的速度正常吗？...

沉淀用水洗后是白色的，转接后菌液生长速度不正常，10小时左右基本没变化，之后几小时就浑浊了。之前也涂过一次板，2天后没长菌落，第二天后就长了十几个白色菌落，有臭味并且不饱满，隔几天后菌落水分蒸发就干了
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8楼2016-01-04 17:28:15
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南雪苏

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 南雪苏 at 2016-01-04 17:28:15
沉淀用水洗后是白色的，转接后菌液生长速度不正常，10小时左右基本没变化，之后几小时就浑浊了。之前也涂过一次板，2天后没长菌落，第二天后就长了十几个白色菌落，有臭味并且不饱满，隔几天后菌落水分蒸发就干了...

你也是做酵母的吗？可以借鉴一下你的实验方法不？万分感谢
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9楼2016-01-04 17:30:23
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