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MR_zang

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白走分子筛纯化 已有2人参与

小弟用G-75纯化我的目的蛋白。目的蛋白是经过SUMO酶酶切后的,因为含有杂蛋白,目的蛋白分子量1.4KDa、杂蛋白分子量3.5KDa、4.5KDa。过了G-75后,没有洗脱峰,就用0.1mol/l 的NaOH洗了一遍,有洗脱峰。就觉得一开始的洗脱液(UP水)环境,蛋白会不稳定,就用了2mol/l的尿素作为蛋白的缓冲液和洗脱液,但还是没有东西洗脱出来,就感觉填料有问题(调料一开始的时候出现了干柱和填料压缩的状况),但老板也没说换填料了,求解原因啊?
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wei_198211

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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MR_zang(sytucom代发): 金币+5, 感谢应助 2016-01-14 19:18:35
感觉好像是产生非特异性吸附了,蛋白都吸到柱子上下不来。尿素电导很低,自然也洗不下来。根据你的pH要求,可以试试PB、醋酸、Tris缓冲液,其中加上0.1-0.15M氯化钠可明显降低非特异性吸附。
3楼2016-01-06 01:02:54
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zinfly

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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MR_zang(sytucom代发): 金币+2, 感谢应助,希望继续关注楼主回复,谢谢 2016-01-05 10:07:50
MR_zang(sytucom代发): 金币+3, 感谢应助 2016-01-14 19:18:16
干柱最好重装,压缩是因为调料在不同溶剂里面的润胀不一样,建议换个缓冲液,多冲一些时间,也可以用小柱先试试。

发自小木虫Android客户端
2楼2016-01-05 00:17:05
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wei_198211

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

另外你的G75好像不太适合分离这几个分子量的蛋白,就算都出峰,可能也非不太开,可以问问厂家,换一款适合分离5000以内的填料
4楼2016-01-06 01:05:44
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