24小时热门版块排行榜    

查看: 984  |  回复: 3
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

MR_zang

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白走分子筛纯化 已有2人参与

小弟用G-75纯化我的目的蛋白。目的蛋白是经过SUMO酶酶切后的,因为含有杂蛋白,目的蛋白分子量1.4KDa、杂蛋白分子量3.5KDa、4.5KDa。过了G-75后,没有洗脱峰,就用0.1mol/l 的NaOH洗了一遍,有洗脱峰。就觉得一开始的洗脱液(UP水)环境,蛋白会不稳定,就用了2mol/l的尿素作为蛋白的缓冲液和洗脱液,但还是没有东西洗脱出来,就感觉填料有问题(调料一开始的时候出现了干柱和填料压缩的状况),但老板也没说换填料了,求解原因啊?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wei_198211

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
MR_zang(sytucom代发): 金币+5, 感谢应助 2016-01-14 19:18:35
感觉好像是产生非特异性吸附了,蛋白都吸到柱子上下不来。尿素电导很低,自然也洗不下来。根据你的pH要求,可以试试PB、醋酸、Tris缓冲液,其中加上0.1-0.15M氯化钠可明显降低非特异性吸附。
3楼2016-01-06 01:02:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

zinfly

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
MR_zang(sytucom代发): 金币+2, 感谢应助,希望继续关注楼主回复,谢谢 2016-01-05 10:07:50
MR_zang(sytucom代发): 金币+3, 感谢应助 2016-01-14 19:18:16
干柱最好重装,压缩是因为调料在不同溶剂里面的润胀不一样,建议换个缓冲液,多冲一些时间,也可以用小柱先试试。

发自小木虫Android客户端
2楼2016-01-05 00:17:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wei_198211

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

另外你的G75好像不太适合分离这几个分子量的蛋白,就算都出峰,可能也非不太开,可以问问厂家,换一款适合分离5000以内的填料
4楼2016-01-06 01:05:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0703化学调剂 ,六级已过,有科研经历 +11 曦熙兮 2026-03-15 11/550 2026-03-19 17:13 by yywzz
[考研] 0703化学调剂 +4 18889395102 2026-03-18 4/200 2026-03-19 16:13 by 30660438
[考研] 一志愿武汉理工材料工程专硕调剂 +4 Doleres 2026-03-19 4/200 2026-03-19 15:27 by 丁丁*
[考研] 085601材料工程专硕求调剂 +10 慕寒mio 2026-03-16 10/500 2026-03-19 15:26 by 丁丁*
[考研] 304求调剂 +3 曼殊2266 2026-03-18 3/150 2026-03-19 14:42 by peike
[考研] 0703化学调剂 +5 pupcoco 2026-03-17 8/400 2026-03-19 13:58 by houyaoxu
[考研] 一志愿 西北大学 ,070300化学学硕,总分287,双非一本,求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-19 3/150 2026-03-19 13:36 by houyaoxu
[考研] 294求调剂材料与化工专硕 +11 陌の森林 2026-03-18 11/550 2026-03-19 13:22 by houyaoxu
[考研] 328求调剂,英语六级551,有科研经历 +4 生物工程调剂 2026-03-16 12/600 2026-03-19 11:10 by 生物工程调剂
[考研] 求材料调剂 +10 隔壁陈先生 2026-03-12 10/500 2026-03-19 09:15 by 无际的草原
[考研] 311求调剂 +4 冬十三 2026-03-18 4/200 2026-03-18 21:47 by 尽舜尧1
[考研] 303求调剂 +4 睿08 2026-03-17 6/300 2026-03-18 11:01 by Iveryant
[考研] 0703化学调剂 +3 妮妮ninicgb 2026-03-17 3/150 2026-03-18 10:29 by macy2011
[考研] 265求调剂 +3 梁梁校校 2026-03-17 3/150 2026-03-18 09:12 by zhukairuo
[考研] 268求调剂 +8 一定有学上- 2026-03-14 9/450 2026-03-17 17:47 by laoshidan
[考研] 一志愿,福州大学材料专硕339分求调剂 +3 木子momo青争 2026-03-15 3/150 2026-03-17 07:52 by laoshidan
[考研] 304求调剂 +3 曼殊2266 2026-03-14 3/150 2026-03-16 16:39 by houyaoxu
[考研] 330求调剂 +3 ?酱给调剂跪了 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:13 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:41 by JourneyLucky
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +3 d如愿上岸 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:43 by houyaoxu
信息提示
请填处理意见