24小时热门版块排行榜    

查看: 985  |  回复: 3
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

MR_zang

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白走分子筛纯化 已有2人参与

小弟用G-75纯化我的目的蛋白。目的蛋白是经过SUMO酶酶切后的,因为含有杂蛋白,目的蛋白分子量1.4KDa、杂蛋白分子量3.5KDa、4.5KDa。过了G-75后,没有洗脱峰,就用0.1mol/l 的NaOH洗了一遍,有洗脱峰。就觉得一开始的洗脱液(UP水)环境,蛋白会不稳定,就用了2mol/l的尿素作为蛋白的缓冲液和洗脱液,但还是没有东西洗脱出来,就感觉填料有问题(调料一开始的时候出现了干柱和填料压缩的状况),但老板也没说换填料了,求解原因啊?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wei_198211

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
MR_zang(sytucom代发): 金币+5, 感谢应助 2016-01-14 19:18:35
感觉好像是产生非特异性吸附了,蛋白都吸到柱子上下不来。尿素电导很低,自然也洗不下来。根据你的pH要求,可以试试PB、醋酸、Tris缓冲液,其中加上0.1-0.15M氯化钠可明显降低非特异性吸附。
3楼2016-01-06 01:02:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

zinfly

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
MR_zang(sytucom代发): 金币+2, 感谢应助,希望继续关注楼主回复,谢谢 2016-01-05 10:07:50
MR_zang(sytucom代发): 金币+3, 感谢应助 2016-01-14 19:18:16
干柱最好重装,压缩是因为调料在不同溶剂里面的润胀不一样,建议换个缓冲液,多冲一些时间,也可以用小柱先试试。

发自小木虫Android客户端
2楼2016-01-05 00:17:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wei_198211

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

另外你的G75好像不太适合分离这几个分子量的蛋白,就算都出峰,可能也非不太开,可以问问厂家,换一款适合分离5000以内的填料
4楼2016-01-06 01:05:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 294求调剂材料与化工专硕 +13 陌の森林 2026-03-18 13/650 2026-03-19 19:41 by maocaozhuxi
[考博] 东华理工大学化材专业26届硕士博士申请 +8 zlingli 2026-03-13 8/400 2026-03-19 16:32 by 轻松不少随
[考研] 能源材料化学课题组招收硕士研究生8-10名 +4 脱颖而出 2026-03-16 12/600 2026-03-19 16:17 by 脱颖而出
[考研] 一志愿北京化工大学0703化学318分,有科研经历,求调剂 +3 一瓶苯甲酸 2026-03-14 3/150 2026-03-19 15:17 by 尽舜尧1
[考研] 求调剂,一志愿:南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕,总分289分 +3 @taotao 2026-03-19 3/150 2026-03-19 14:07 by peike
[考研] 328求调剂,英语六级551,有科研经历 +3 生物工程调剂 2026-03-17 7/350 2026-03-18 20:41 by Wangjingyue
[考研] 344求调剂 +6 knight344 2026-03-16 7/350 2026-03-18 20:13 by walc
[考研] 一志愿武理材料305分求调剂 +5 想上岸的鲤鱼 2026-03-18 6/300 2026-03-18 17:53 by 无际的草原
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +5 梨花珞晚风 2026-03-17 5/250 2026-03-18 14:49 by haxia
[考研] 304求调剂 +12 小熊joy 2026-03-14 13/650 2026-03-18 12:34 by Linda Hu
[考研] 材料,纺织,生物(0856、0710),化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 9/450 2026-03-18 10:28 by Eember.
[考研] 332求调剂 +6 Zz版 2026-03-13 6/300 2026-03-17 17:03 by ruiyingmiao
[考研] 材料与化工专硕调剂 +5 heming3743 2026-03-16 5/250 2026-03-17 14:03 by 勇敢太监王公公
[考研] 278求调剂 +3 Yy7400 2026-03-13 3/150 2026-03-17 08:24 by laoshidan
[基金申请] 今年的国基金是打分制吗? 50+3 zhanghaozhu 2026-03-14 3/150 2026-03-16 17:07 by 北京莱茵润色
[考研] 304求调剂 +4 ahbd 2026-03-14 4/200 2026-03-16 16:48 by 我的船我的海
[考研] 327求调剂 +6 拾光任染 2026-03-15 11/550 2026-03-15 22:47 by 拾光任染
[考研] 材料与化工 323 英一+数二+物化,一志愿:哈工大 本人本科双一流 +4 自由的_飞翔 2026-03-13 5/250 2026-03-14 19:39 by hmn_wj
[考研] 297一志愿上交085600求调剂 +5 指尖八千里 2026-03-14 5/250 2026-03-14 17:26 by a不易
[考研] 一志愿哈工大材料324分求调剂 +5 闫旭东 2026-03-14 5/250 2026-03-14 14:53 by 木瓜膏
信息提示
请填处理意见