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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 基因克隆
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zhang-vv

金虫 (小有名气)

[求助] 基因克隆 已有3人参与

300+bp的基因克隆，我从组织中提的RNA，浓度1800ng/ul，260/280=1.89,260/230=0.68。引物用primer5设计的，评估项均无发夹结构，引物二聚体。克隆出来的东西经常都是引物二聚体或是小片段。请各位指教问题出在哪里，应如何改进实验。

基因克隆
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永不放弃，总会梦想成真。
1楼 2016-01-04 09:59:59
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lifechuteng

新虫 (小有名气)
有逆转录么
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2楼2016-01-05 13:54:43
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lipo2014

新虫 (初入文坛)
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2016-01-05 19:31:07
是啊，提RNA后不都应该逆转录再pcr么？没见过直接用RNA啊，如果我问的太蠢请忽略回复。。。，或者给我涨涨知识也行~
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3楼2016-01-05 15:04:18
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zhang-vv

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lifechuteng at 2016-01-05 13:54:43
有逆转录么

有啊，反转录是用的试剂盒。所以模板的质量还是取决于RNA的质量。请教RNA提取还去如何改进。
赞一下 回复此楼
永不放弃，总会梦想成真。
4楼2016-01-06 23:29:16
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sloop112

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
5楼2016-02-02 10:43:33
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gnot_nail

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

RNA需反转录为cDNA 然后以cDNA为模板 PCR。。
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6楼2016-02-02 18:53:05
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the way

新虫 (初入文坛)
引物不行

发自小木虫Android客户端
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7楼2016-02-02 23:22:06
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