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zhang-vv

金虫 (小有名气)

[求助] 基因克隆 已有3人参与

300+bp的基因克隆,我从组织中提的RNA,浓度1800ng/ul,260/280=1.89,260/230=0.68。引物用primer5设计的,评估项均无发夹结构,引物二聚体。克隆出来的东西经常都是引物二聚体或是小片段。请各位指教问题出在哪里,应如何改进实验。

基因克隆
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永不放弃,总会梦想成真。
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lifechuteng

新虫 (小有名气)

有逆转录么
2楼2016-01-05 13:54:43
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lipo2014

新虫 (初入文坛)

感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2016-01-05 19:31:07
是啊,提RNA后不都应该逆转录再pcr么?没见过直接用RNA啊,如果我问的太蠢请忽略回复。。。,或者给我涨涨知识也行~
3楼2016-01-05 15:04:18
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zhang-vv

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lifechuteng at 2016-01-05 13:54:43
有逆转录么

有啊,反转录是用的试剂盒。所以模板的质量还是取决于RNA的质量。请教RNA提取还去如何改进。
永不放弃,总会梦想成真。
4楼2016-01-06 23:29:16
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sloop112

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

5楼2016-02-02 10:43:33
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gnot_nail

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

RNA需反转录为cDNA 然后以cDNA为模板 PCR。。
6楼2016-02-02 18:53:05
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the way

新虫 (初入文坛)

7楼2016-02-02 23:22:06
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