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wuruiwei2014

新虫 (初入文坛)

[求助] 古菌V3-V4区PCR相关问题

我用参考文献上古菌V3-V4区引物:0357F/0691R,PCR反应体系(50μl):上下游引物各2.5μl, dNTPs5μl, 10×Easy Taq buffer5μl, Easy Taq DNA聚合酶1μl, DNA1μl,补ddH2O至50μl,扩增程序:95 ℃预变性5 min;30个循环:95℃变性30s,52 ℃退火45 s,72 ℃延伸1 min;72 ℃终延伸10 min。结果无条带,重复好几次了,之前也用此条件P过,虽特异性不好 ,但有目的条带,重新换样品之后就P不出来了,本人知识有限,能想到的问题也有限,希望各位友友指点迷津,谢谢啦@biostar2009
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