| 查看: 2113 | 回复: 8 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
测序结果少了500bp可是PCR结果完全正确
|
|||
|
各位高手，我是新手，请大家不吝赐教。 我半年前克隆了一个大片段基因簇 （大概有80KB）到BAC里面，然后想做异源表达，可是发现不了目标产物，因此怀疑是基因簇在克隆时出现错误。所以我就把这个质粒提取出来交给商业机构测序，结果出来以后，我用NCBI去对比测序结果和真实的基因簇序列，结果显示：除了基因簇中间的一个重要功能基因缺失了500 bp 以外，其余的结果都是100% 的 identity. 然后我深深地怀疑这个结果，总感觉不太可能，所以我就设计了一对PCR引物，用来扩增这些缺失的碱基，结果PCR是阳性的，为了进一步确认，我又把这个PCR的产物提纯测序，结果正是缺失的那500 bp. 对了忘了说明，基因簇的测序结果就是从缺失部分地两端开始读取和结束的，会不会是这个原因呢？菜鸟一个，说的不明白请谅解，如果各位达人有什么疑问，我可以补充，快要被这个问题烦死了。下面画了一个草图，新手金币不多，万分感谢。  Picture1.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有265人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
|
建议换个机构再测试一次，测试的是能够覆盖500bp的新的PCR片段，你前后多加个1000bp足够了吧。 另外，我还真是没有见过插入80kb的片段的质粒，什么质粒，可以插入那么大片段。 发自小木虫Android客户端 |
8楼2016-01-04 08:14:59
2楼2016-01-04 07:14:08
3楼2016-01-04 07:18:13
4楼2016-01-04 07:21:27